植物基因转化常用方法(植物遗传,农杆菌、病毒介导和基因枪转化法).docxVIP

. 一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生 质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、 PEG 介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。 另一类是生物介导的转化方法， 主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物 的遗传转化。 二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的 Ti 质粒与 T-DNA 的整合机制 几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染，而产生根瘤。它是一种革兰氏阴 性土壤杆菌（ A. tumefaciens ）。其致瘤特性是由 Ti （ tumor －inducing ）质粒介导的。农杆根瘤菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位分泌出酚类物质乙酰丁香 酮和羟基乙酰丁香酮，这些酚类物质可以诱导 Vir（ Virulence region) 基因的启动表达， Vir 基因的产物将 Ti 质粒上的一段 T－DNA 单链切下，而位于根瘤染色体上的操纵子基 因产物则与单链 T－ DNA 结合，形成复合物，转化植物根部细胞。 T－ DNA 上有三套基 因，其中两套基因分别控制合成植物生长素与分裂素，促使植物创伤组织无限制地生长 与分裂，形成冠瘿瘤。 第三套基因合成冠瘿碱， 冠瘿碱有四种类型： 章鱼碱（ octopine ）、胭脂碱（ no