10.3 微生物鉴定——经典方法与现代方法.pdf

第四节 微生物分类鉴定的方法 微生物分类鉴定的4个水平 ① 细胞的形态和习性水平 ② 细胞组分化学水平 ③ 蛋白质水平 ④ 核酸水平 一、微生物分类鉴定中的经典方法 ① 获得该微生物的纯培养物 ② 测定一系列必要的鉴定指标 微生物分类步骤 ③ 查找权威性的菌种鉴定手册 （一）经典的鉴定指标 1. 形态学指标 2. 生理、生化指标 3. 生态特性指标 4. 生活史 5. 血清学反应 6. 对噬菌体的敏感性 7. 其他 （二）微生物的微型、简便、快速 或自动化鉴定技术 1. API细菌数值鉴定系统 2. “Enterotube”系统 3. “Biolog”全 自动和手动细菌鉴定系统 4. 细菌和病毒的灵敏快速鉴定法 全 自动微生物鉴定仪——Biolog Biolog 系统 p美国安普科技中心 （ATC US）生产，可自动 化鉴定，可鉴定 1140 种细菌； - Ø 乳酸菌57种 Ø G 细菌566种 + Ø 酵母菌267种 Ø G 细菌250种 p特点：自动化、快速 （4~24 h ）、高效和应用 范围广； 二、微生物分类鉴定中的现代方法 （一）通过核酸分析鉴定微生物遗传型 （二）细胞化学成分用作鉴定指标 （三）数值分类法 （一）通过核酸分析鉴定微生物遗传型 1. DNA碱基比例的测定 2. 核酸分子杂交法 3. rRNA寡核苷酸编 目分析 4. 微生物全基因组序列的测定 1. DNA碱基比例的测定 Ø 指(G+C) mol%值 （guanine plus cytosine base mole percent ），简称 （GC ratio ）或 （GC value ）； Ø 发表微生物新种时必须具有的重要指标； Ø 表示DNA分子中鸟嘌呤和胞嘧啶所 占的摩尔百分 比值，公式为 GC比的特点 ① 亲缘关系相近的种，其GC 比接近；反之， GC 比相近的两个种，其亲缘关系 很 接近； • 例如，Strep tomy ces （链霉菌属）中的500余个种 的GC 比都在65%~74%； • 例如，Saccharomy ces cerevisiae （酿酒酵母）、 Bacillus subtilis （枯草芽孢杆菌）和Homo sap ien （人类）GC 比十分接近，但其核酸序列差别大。 GC比的特点 ② GC 比差距很大的微生物，其亲缘关系必然 较远； • 例如， Ø Actinomy ces bovis （牛型放线菌）， Ø E. coli， Ø Nocardia f arcinica （鼻疽诺卡氏菌）， GC比的特点 ③ GC 比是建立新分类单元的可靠指标。 • GC 比相差低于2%时，没有分类学上的意义； • 种内判断指标 Ø 各菌株间的差别在