K210 食品微生物检验技术、K209 农产品微生物检验技术 配套电子教材、配套电子教材 微生物检验技术-电子教材7-2-微生物快速检测技术-微生物快速检验试纸法和试剂盒法.doc

农产品与食品质量检测技术教学资源库 《农产品/食品微生物检验技术》课程电子教材 微生物快速检测技术 二、微生物快速检验试纸法和试剂盒法 微生物快速检验方法-3M试纸片 3M是一家为各种日常生活难题提供创新性解决方案的跨国公司。我们所熟知的3M各系列口罩，交通运输中使用的3M反光贴、各类医用或家庭医疗器械等都是3M公司的产品。在微生物快速检验领域，3M也颇有建树，由于其产品的优越性和稳定性，3M PetrifilmTM 测试片在微检领域被广泛使用。 3M试纸片简介 食物3M Petrifilm 的方法得到了包括AOAC、 FDA、 FSIS、USDA、NMKL、AFNOR、 CFRA、DIN在内的众多国际权威机构的认证认可。这使得使用3M试纸片的检测方法和检测结果在国际上可以更好的被接受。目前，在中国，3M Petrifilm系列产品也越来越多被企业作为日常的检测方法，替代传统的平板检测。 Petrifilm是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有： 菌落总数测试片 、 大肠菌群计数测试片 、快速 大肠菌群计数测试片、 高灵敏度大肠菌群 计数测试片、 大肠杆菌 / 大肠菌群 计数测试片 、肠杆菌科测试片、 霉菌和酵母菌计数测试片、 快速金黄色葡萄球菌计数测试片、 环境李斯特菌测试片。 3M试纸片特点 使用3M试纸片，只需接种、培养、计数3步，就可实现快速准确的测定，避免了微检繁杂的操作。那么，3M试纸片有哪些特点呢？3M试纸片的第一个特点，不同于传统的培养基，3M试纸片采用涂布/粘合技术；3M试纸片第二个特点，采用3M膜技术进行微生物产气检验，同时指示剂显色，计数结果准确；第三，3M试纸片与传统的培养皿相比，体积同一小张纸片相同，轻薄的设计大大节约了操作与培养空间；3M试纸片的第四个特点，3M 试纸片上覆盖的表面膜可有效地防止菌落向外污染；第五个特点，3M试纸片采用冷水可溶性凝胶，不同于传统的凝胶需先加热熔化，再制备平皿，避免了检测的热损伤；3M试纸片的第6个特点，简单的纸片降低了诸如培养皿掉落、破碎等带来的物理性风险。 3M试纸片操作步骤 在3M公司的主页上（/wps/portal/3M/zh_CN/CNMicrobiology/Home/Petrifilm/handbook/）可以下载到每一种试纸片的详细操作手册与判读说明，并且可以在线观看3M试纸片的操作录像。 我们以其中的菌落总数试纸片为例，学习3M试纸片的使用标准化的检测方法：3M的菌落总数试纸片是最常用的测定样品中菌落总数的试纸片，3M的各类试纸片都有规范的操作流程与判读方法。在操作手册中，首先介绍了3M试纸片的合理存放，3M试纸片需要冷藏，并需注意保质期，且需在开包前将包装物恢复至室温；对于已开封的包装，继续存放时则需用胶带封禁封口；并不在冷藏，同时注意需要在1个月内使用完。 样品制备 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。 固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。如样品均质时间超过2 min，应在均质杯外加冰水冷却。 干粉：无菌操作，称取25 g样品，置盛225 mL生理盐水和适量玻璃珠的无菌均质杯内，迅速振摇，将样品混匀，制成 1:10 的样品匀液。振摇时，幅度为30 cm，7 s内振摇25次，也可以极其振摇15 s。 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5 cm。吸管内液体要在2~4 s内完全排入稀释剂。不要在稀释剂中吹洗吸管。 无菌制备样品，制备10-1、10-2、10-3适宜的稀释度，并均质。 接种 选择合适的连续3个稀释度，揭开试纸片上层膜，接种1 mL样液垂直滴加在试纸片中央处，做两个平行重复，小心盖上上层莫，注意不要有气泡。 用包装中适配的压板凹面朝下，对准后，轻压30秒后，静置试纸片至少1 min待培养基凝固。 培养 3M试纸片透明面朝上，堆叠不超过20片，放入培养箱中培养，36±1℃，培养48±2 h。 计数 到培养时间后立即计数，如果不能立即进行计数，可以将试纸片放在-15℃条件下，不超过7 d.计算结果只保留两位有效数字，见表1 表1 对所有成对的平板都要计数，并将计数的结果按规定的计算后报告。25~250 CFU为正常计