汪光华天然药物分离实验课.docVIP

天然药物分离课程实验报告 茶叶功能物质的提取与分离 华南师范大学 生命科学学院 2014级 微生物与生化药学 1 实验内容 1.1 茶叶中功能物质咖啡因和茶多酚的柱层析提取、浓缩、柱层析分离； 1.2 薄板和液相检测。 2实验材料 2.1 材料：烘干的茶叶粉末 2.2 试剂：40%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、聚酰胺、2%盐酸、2%NaOH、异丁醇、醋酸 2.3 仪器：玻璃柱（Φ1.8cm、Φ2.0cm）、层析缸、薄层板、液相色谱仪 3实验方法 3.1 样品处理 将茶叶用粉碎机粉碎，过40目筛，65℃烘干4h，密封干燥保存，备用。 3.2 茶叶标准提取液的制备 以国标法GB-8312-2002的规定作为标准提取方法，制备茶的标准提取液，用此法测定的各组分含量作为标准含量，即100%。 3.3 柱层析提取（如图1所示） 8g 烘干的茶叶粉末 40%乙醇20ml，湿法装柱，浸泡2h 提取洗脱液（40%乙醇） 第一份提取液A 第二份B 第三份C 每份样品各取1ml检测备用 将三份提取液进行减压浓缩至30ml 于4℃冰箱保存，作为柱层析分离的上样液 图1 茶叶中功能物质咖啡因和茶多酚的柱层析提取 3.4 柱层析分离 3.4.1 聚酰胺的预处理及装柱 将新的聚酰胺用3倍体积的95%乙醇浸泡过夜，不断搅拌除去气泡，使其充分溶胀，再用95%乙醇洗脱至流出液透明，蒸干无残留物。再用蒸馏水洗至无醇味。将预处理好的聚酰胺装入Φ2.0cm的玻璃柱，填充至径高比为1:10。 3.4.2 上样及洗脱（如图2所示） 取5ml的茶提取液 以1BV/h的速度上柱 收集上样后的第一份样液，约6ml，编号为3-0 用大量纯水洗去杂质 编号为3-1—3-6 收集纯水洗脱液共6份，每份40ml 每份各取1ml 编号为3-1—3-6 用约120ml 每份各取1ml留样检测， 每份各取1ml留样检测， 编号为3-7, 3-8, 3-9，3-10 将3份洗脱液合并后取1ml留样检测，编号为3-10,3-11 收集80%乙醇洗脱液共3份，每份40ml 合并，回收乙醇 合并，回收乙醇 用95%乙醇洗脱 编号为3-12,3-13 收集95%乙醇洗脱液40ml 取1ml 编号为3-12,3-13 将所收集的样品进行TLC及液相检测 图2 茶叶中功能物质咖啡因和茶多酚的柱层析分离 4 实验结果与分析 4.1 薄层色谱（TLC）检测 展开剂：异丁醇-醋酸-水（4:1:5），于层析缸中预饱和30min，取3-0, 3-1—3-6, 3-10, 3-11号洗脱液（依次编号为1—9）和标准品点于同一块硅胶G薄层板上，置于展开剂中展开，展开至上行约2cm取出，晾干后于碘缸中进行碘染。 实验结果：碘染后于自然光下观察，3-1, 3-10, 3-11号样品与茶多酚的标准品具有相同的黄绿色斑点（如图-3所示）。3-1为用纯水洗脱杂质时所收集的第1份样液；3-10为3份80%乙醇洗脱液的合并液；3-13为95%乙醇的洗脱液。 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 图3 茶叶中功能物质咖啡因和茶多酚的TLC检测 0：标准品混合液 3-0 1: 柱层析分离水洗脱第一份洗脱液3-1 2: 柱层析分离水洗脱第二份洗脱液3-2 3: 柱层析分离水洗脱第三份洗脱液3-3 4: 柱层析分离水洗脱第四份洗脱液3-4 5: 柱层析分离水洗脱第五份洗脱液3-5 6: 柱层析分离水洗脱第七份洗脱液3-6 7: 柱层析分离水洗脱第八份洗脱液3-7 8: 柱层析分离水洗脱第九份洗脱液3-8 9: 柱层析