药品紫外分光光度检验法.pdf

药品紫外分光光度检验法 一 目 的：制定紫外分光光度法，规范紫外分光光度法的测定操作。 二 适用范围：适用于紫外分光光度法的测定。 三 责 任 者：品控部。 四 正 文 1 简述 紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收 度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和 含量测定。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求 算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性或可用吸收峰波长或吸收度 比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收， 或杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。 物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主 要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体 系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~850nm）产生吸收。 通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190~900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯一比尔（Lamber—Beer）定律为 光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析依据，其数学表达式为： 1 A=log ECL T 式中 A为吸收度； T为透光率； E为吸收系数； C为溶液浓度； L为光路长度 如溶液的浓度（C）为 1%（g/ml），光路长度（L）为 1cm，相应的吸收系数为百分吸收 系数，以 E1%1cm 表示。如溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为 1cm 时，则相应 有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 2 仪器 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理 系统等部分组成。 为了满足紫外一可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前 者用于紫外区，后者用于可见光区。 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。 色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色 散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光 栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性 排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计 二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品 或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波 长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光 束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值可直接用记 录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程序高，但作含量测定时，为求 准确起见，仍宜用固定波长测量方式。 3 紫外分光光度计的检定 3.1 波长准确度 3.1.1 波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外一可见分光光度计波长准确度允许误 差为±0.5nm。单光不棱镜型350nm±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4.8nm。 3.1.2 波长准确度检定方法 3.1.2.1 用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）直接对准进光 狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如 15nm/min）、响应“快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0~100%，在200~800nm，范围内单 方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要进可对指定波 长进行“单峰”扫描）。 单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100（或选择开 关放在×1，透光率放在10），关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm