细胞RNA的提取及鉴定、RT-PCR检测p53基因的表达.docx

实验报告 实验题目：细胞 RNA的提取及鉴定、RT-PCR佥测p53基因的表达 报告人：张铨 合作者：殷悦涵 实验日期： 2016.4.26 一、 实验原理 细胞RNA的提取及鉴定 细胞内RNA?常与蛋白质结合，以核蛋白（RNP的形式存在。分离、制备 RNA寸首先须破碎细胞，使RNF释放到溶液中并与蛋白质分离，然后将 RNA同其 他的细胞成分分离开并保证RNA的完整性。Trizol法分离提取的RNA产率高、 纯度好且不易降解，它是一种总RNAW提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总 RNA由于RNase能迅速降解RNA所以需创造一个无 RNase的环境，在各个环 节避免它的污染。评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性，采用紫外分光 光度法测定RNA的浓度和纯度，纯 RNA的A260/280=2.0，实验室条件下一般在 1.7-2.0 之间，低于该值说明有蛋白污染，需要进一步抽提。 RT-PCR 佥测 p53 基因的表达 PCF是一种体外大量扩增特异 DN/片段的分子生物学技术，利用已知序列作 为引物，将两引物之间的特定 DNA片段进行复制，经过多次循环是模板上特定 DNA拷贝数呈指数级增长。基本过程为变性、退火、延伸三个步骤循环往复进行， 每一轮过后特定的DNA片段的分子数增加一倍。 RT-PCR各mRN反转录合成cDNA后再经PCR进行大量扩增，实质上是对mRNA 的扩增，常