《透射电镜的原理与演示》.pptVIP

四、扫描电镜的结构与成像原理 1. 扫描电镜的基本结构 电子光学系统 电子枪 电磁透镜 扫描线圈 样品室 信号的收集处理及显示系统 真空系统 供电保护系统等 扫描电镜 电子枪 电磁透镜 扫描线圈 样品室 信号的收集处理系统 真空系统 供电 保护 系统 显示系统(显象管) (1~10KV) 电子枪灯丝 电磁 透镜 探测器 电磁 透镜 扫描线圈的 束偏转器 样品托 样品 显象管 电子光学系统 扫描电镜的结构简图 2. 扫描电镜的成像原理 电子枪 接 受、 转变成光子 放 大、 转换成电压信号 电子束 电磁透镜 样品表面 扫描线圈 次级电子信号 探测器 光电倍增管 显象管/荧光屏 样品表面上相应点 所发出的次级电子数 荧光点的亮度 电子枪灯丝 电磁 透镜 探测器 电磁 透镜 扫描线圈的 束偏转器 样品托 样品 显象管 次级电子 扫描电镜成像原理的简单图示 (1) 扫描电镜所用样品的制备方法简便(固定、干燥和喷金)，不需经过超薄切片； (2) 扫描电镜采用的是次级电子成像； (3) 扫描电镜所观察到图像景深长，图像富有立体感； (4) 图像的放大倍率在很大范围内连续可变(101~105×)； (5) 样品的辐射损伤及污染程度小等。 扫描电镜在结构和工作原理上的特点： (1) 分辨率还不够高(1~10nm)； (2) 只能显示样品的表面形貌，无法显示内部详细结构。 可观察到样品的内部结构； 可观察到富有立体感的图像； 提高了分辨率。 扫描电镜的局限性： 冰冻蚀刻技术(freeze etching)： 利用“复膜(replica)”在透射电镜下观察： 扫描电镜照片演示 人耳听毛细胞的扫描电镜照片 扫描电镜照片演示 人RBC的扫描电镜照片 有被小泡的扫描电镜照片 转化细胞 扫描电镜照片演示 细胞褶皱的扫描电镜照片 分裂沟的扫描电镜照片 扫描电镜照片演示 冰冻蚀刻技术 冰冻断裂技术也是研究细胞内部各种细胞器结构 的有用手段。 (freeze-etching techniques) 亦称冰冻断裂(freeze-fracture)，是研究生物膜内部结构的一种有用的技术，关于膜结构的许多资料即是利用这种方法取得的。 ①将标本于-100℃干冰中或-196℃液氮中，超低温冰冻。 ②然后用冰刀骤然将标本冲断开，升温后冰在真空条件下迅即升华，暴露出了断裂面结构——蚀刻(etching)。 蚀刻 断裂 (2) 冰冻蚀刻技术的操作步骤: ③蚀刻后，再向断裂上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下，此膜即为复膜(replica)。 复膜 ④复膜显示出了标本蚀刻面的形态，可置于透射电镜下观察。电镜下的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。 细胞质膜的冰冻蚀刻电镜照片 冰冻蚀刻电镜照片演示 核膜 紧密连结的冰冻蚀刻电镜照片 微绒毛的冰冻蚀刻电镜照片 连结子 基膜 冰冻蚀刻电镜照片演示 * * 其电子枪所发射电子的波长一般为1~10nm，使用的电压范围为1~10KV。扫描线圈为扫描电镜所特有的结构，可作光栅状扫描，以便在荧光屏上显示出扫描图像。扫描电镜的样品室较大，样品有专用的样品托，可在样品室内进行各不同方向的平移和倾转；另外，在样品室内还装配有检测部件。信号的收集、处理及显示系统包括次级电子探测器、光电倍增管和显象管。次级电子探测器又由闪烁体和光导管构成，主要作用是收集由标本表面发射出的次级电子，并将其转变成光子；光电倍增管可将光子信号放大后，又将其转换成电压信号；而显象管便便可将所接受到的电压信号转变成为亮度不同的图像。 透射电镜的原理与演示 分辨力(resolution)：指显微镜能将近邻的两个质点分辨清楚的能力, 通常是用相邻两点间的距离(D)来表示。 一、电子显微镜出现的必然性 光源的波长 镜口率(N.A.) 1. 分辨力 可见光波长为400~700nm (平均550nm) 取决于镜口角和物镜与标本间介质的折射率 波长： 镜口率(N.A.)的大小： 镜口角 物镜与标本之间介质的折射率 空气的折射率为1 水为1.33 香柏油为1.515 ?-溴萘为1.66 ? 紫外光显微镜：0.1 ?m 光镜分辨力的最小数值：≤0.2 ?m 一般光镜设计的最大放大倍数为1,000~1,500? 光学分辨率的极限！ 有效放大： 指本来用肉眼看不清楚的物体经显微镜放大成像后可以分辨清楚的放大 指本来用肉眼能看清楚的物体经放大镜、幻灯机或投影仪等放大成像后可以分辨得更清楚的放大。 无效放大： 各种光与电子束的波长比较 名 称 波长(nm) 可见光 760~390 紫外光 390~13 X-射线 13~0.05 ?-射线 1~0.005 电子束 100V 0.123 10,000V 0.0122