动物体内转染(Entranster)答疑.docx

动物体内转染答疑 用 RNA 或 DNA 直接注射动物完成干扰和表达 动物体内转染，简单地说，就是用 RNA 和 DNA 直接打动物完成干扰和表 达。再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动 物转基因或者基因敲除的实验， 无需再用病毒或者基因敲除动物。 实验周期可以 缩短为几天，花费几千元即可进行实验。 动物体内转染技术的出现， 让广大生物医学研究者， 轻松进行动物的基因干 扰、导入等操作。尤其是临床医学工作者， 可以在很少工作量较少经费的情况下， 直接针对研究的疾病进行动物实验， 发表高水平文章。 比如在英格恩客户已发表 的文章中， 有尾静脉注射 DNA 研究治疗病毒性心肌炎， 有皮下肿瘤注射 miRNA 研究治疗结肠癌，有脑室注射 siRNA 研究脑缺血机理，有皮肤涂抹 siRNA 治疗 皮肤瘢痕等。这些研究都非常有临床和现实意义。 由于动物体内转染技术应用的时间不长，对这种崭新的技术人们还不太了 解。此次受丁香园邀请， 特开此动物体内转染相关实验技术答疑专帖。 对站友们 提出的问题给予解答， 希望能够和大家相互学习， 共同进步。 任何与动物体内转 染有关的问题(包括实验设计、产品、实验过程、结果分析、文献等问题) ，大 家尽管提出，我们会尽力解答，也欢迎站友们参加讨论。 技术资料目录： 体内转染试剂的原理和方法 .动物体内转染技术可以做什么？ .体内转染的原理 .体内转染的过程 .体内转染需要的实验条件 .体内转染适合进行怎样的实验 .体内转染可以在哪些组织器官进行 .应用体内转染试剂发表的部分文献 .动物体内转染和病毒感染的比较 .动物体内转染和基因敲除的比较 体内转染实验的设计 .需要的材料 .需要的时间 .需要的费用 .常见的结果检测方法 体内转染过程相关问题及解答 .体内转染试剂对动物有什么影响？ .注射后，试剂是如何在体内分布的，有靶向性吗？ .转染试剂和核酸需要使用多少？ 提问与解答： 1、如何技术上解决(排除) RNAi 的非特异性？是否需要复原实验( Rescue Experiment)。 2、实验的重复性 /可靠性如何？需要使用多少只动物， 才能实现 90-95%可信度？ 3、遗传性状改变后能维持多久？如果性状的改变是暂时的，那么经过一段时间 后，动物能否恢复到原有的生理状态(没有后遗症)？ 4、 这种 siRNA 的体内注射，在不同的组织中可能转染效率差别很大， 楼主能 否告知哪些组织的转染效率高，哪些低？ 5、不同的组织和注射方法，如何评估干扰效率？ 6、目前有没有携带荧光的 siRNA 可以用于相关实验？ 7、我目前正在用病毒感染的方法，效果不是太好，病毒感染和体内转染有什么 不一样？病毒感染做不好，体内转染能做好吗 ? 8、不是太懂，动物体内转染技术用来干什么，主要的特点和优点是什么？ 9、很感兴趣，你们的动物体内转染试剂有文献支持吗？ 10、再问一下，你们试剂的原理是什么，使用方法麻烦吗？ 11、请问体内转染可以转染肺组织么？ 12、是直接通过气管内注射？ 13、转染的基因过表达能够维持多长时间？ 14、可以直接用于关节内软骨相关基因转染么， 如何转染？直接关节腔注射还是 尾静脉注射？ 15、我想请问一下你们这个转染试剂多少钱？我想直接瘤内注射是否可以？ 16、太好了，找到专家了！请教几个问题，体内转染用慢病毒效果好吗？目的组 织是心肌，是尾静脉注射好呢还是心肌局部注射好？ 17、可以腹膜腔注射么？ 18、每个目的器官用量怎么安排？每次还用同位素检测转染效率， 那也不便宜啊。 19、如果我做大鼠睾丸的 RNA 干扰，您能否建议是尾静脉注射，还是涂抹还是 其他方法呢？ 20、这个实验技术很新呢，眼前一亮，我的实验是移植一种细胞到视网膜下腔， 想要干扰这种细胞中的某个基因的表达， 如果通过常规的体外 RNAi 技术比较麻 烦，想直接在移植细胞的时候同时用你们的这个进行局部体内注射， 这样是否可 以实现呢？ 21、第二个问题是， 我的实验中是要干扰移植细胞中的神经营养因子的表达， 但 是神经营养因子种类很多，包括 bFGF、BDNF 、NT-3、NT-4/5 等，如果想抑制 多种神经营养因子的表达有可能吗？谢谢！ 22、你好，请问想要消除小鼠脑内海马神经元细胞中某种 microRNA 的表达，可 以用你们的转染试剂么？怎么注射，侧脑室注射还是尾静脉注射比较好？另外， 你们试剂的价格是多少？ 问与答： 1、如何技术上解决（排除） RNAi 的非特异性？是否需要复原实验（ Rescue Experiment）。 RNAi 的非特异性是每个 RNAi 实验所必须考虑的，一般通过设计多条针对同一个基因 的 siRNA 等，如果都能得到同样的结果，一般认为是特异性的。如果