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温度对酶活性的影响 【实验目的】 通过检验不同温度下唾液淀粉酶和脲酶的活性，了解温度对酶活性的影响。 【实验原理】 酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶 促反应的速度。通常温度每升高 10℃，反应速度加快一倍左右，最后反应速度达到最大值。 另一方面酶的化学本质是蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此， 反应 速度达到最大值以后，随着温度的升高， 反应速度反而逐渐下降， 以至完全停止反应。 反应 速度达到最大值时的温度称为某种酶作用的最适温度。 高于或低于最适温度时， 反应速度逐 渐降低。 大多数动物酶的最适温度为 37℃～ 40℃，植物酶的最适温度为 50℃～ 60 ℃。但是， 一种酶的最适温度不是完全固定的， 它与作用的时间长短有关， 反应时间增长时， 最适温度 向数值较低的方向移动。 通常测定酶的活性时， 在酶反应的最适温度下进行。 为了维持反应 过程中温度的恒定，一般利用恒温水浴等恒温装置。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。已经证明大多数酶在干燥的固体状态下比较稳 定，能在室温下保存数月以至一年。 溶液中的酶， 一般不如固体的酶稳定， 而且容易为微生 物污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，在高温的情况下，更不稳定。 【实验材料和用具】 1、0.3% 氯化钠的 0.2%的淀粉溶液。 2、稀释 200 倍的唾液。 3、碘化钾–碘溶液：将碘化钾 20 克和碘 10 克溶解在 100ml 水中，使用前稀释 10 倍。 4、 1%尿素溶液。 5、脲酶提取液：取黄豆粉 6 克，加 30% 乙醇 250 毫升，振荡 10 分钟，过滤。可保存 l 星期～ 2 星期。 6、奈斯勒（ Nessler）试剂：称取 5 克碘化钾，溶于 5 毫升蒸馏水中，加入饱和氯化汞 溶液（ 100 毫升约溶解 5.7 克氯化汞） ，并不断搅拌。 直至产生的朱红沉淀不再溶解时，再加 40 毫升 50%氢氧化钠溶液，稀释至 100 毫升，混匀，静置过夜，倾出清液存于棕色瓶中。 奈斯勒试剂是含有大量汞盐的强碱性溶液，所以，它是具有腐蚀性的剧毒试剂。实验 时必须严格遵守操作规程，谨防中毒。此外，实验时所用的玻璃仪器等一切器皿必须洁净， 以除去能抑制酶活性的杂质。 因此， 用奈斯勒试剂作完实验后， 必须将它所污染的试管等一 切器皿充分洗干净。 【实验步骤】 1、温度对唾液淀粉酶活性的影响 唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们遇碘各呈不 同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈 蓝色、 紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色。由于在不同温度下唾液 淀粉酶的活性高低不同， 则淀粉被水解的程度不同， 所以， 可由酶反应混合物遇碘所呈现的 颜色来判断。 取 3 支试管，编号后各加入淀粉溶液 2 毫升。将第 l、 2 号试管放入 37℃恒温水浴中保 温，第 3 号试管放入冰水中冷却， 5 分钟后，向第 l 号试管中加入煮沸 5 分钟～ 15 分钟的稀 释唾液 l 毫升；向第 2、3 号试管加稀释唾液各 l 毫升。摇匀， 20 分钟后取出 3 支试管，各 加碘化钾–碘溶液 2 滴， 混匀， 比较各管溶液的颜色。判断淀粉被唾液酶水解的程度， 并说 明温度对唾液酶活性的影响。 2、温度对脲酶活性的影晌 脲酶