噬菌体展示技术及.pptVIP

噬菌体 口噬菌体是感染细菌、支原体、螺旋体、放线菌 以及蓝细菌等的一类病毒,亦称细菌病毒。 口噬菌体的结构简单,基因数较少,已成为分子 生物学研究的重要工具;另外,因其还可作基 因的载体,故又被广泛应用于遗传工程的研究  噬菌体 噬菌体展示技 术  PhD由来 口1985年, Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基 因Ⅲ,使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示 在噬菌体表面,从而创建了该技术 口1988年 Parmley发现已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合在 噬菌体表面后,可特异性地被抗体选中,因此提出了 通过构建随机肽库了解抗体识别的抗原表位的设想。 口1990年 Scotti将噬菌体随机多肽库成功应用于筛选抗原 表位,之后国内外学者进行了大量的相关研究,有力 地推动了病毒抗原表位的研究进程。  PhD概念 口噬菌体展示:将外源肽或蛋白与特定噬菌体衣 壳蛋白融合并展示于噬菌体表面,进而通过筛 选表达有目的肽或蛋白质的噬菌体,得到大量 富集,然后通过DNA序列测定进行定性  PlltPIX 野生型—基因型一表型 M13噬菌体基因结构插入片段融合蛋白P 示意图(6.4kb M13噬菌体展示外源基因模式图  口因此,噬菌体展示技术堪称表型与基因型的统 一。外源蛋白或多肽的表型和基因型被统一在 了同一噬菌体颗粒内,通过表型筛选就可以获 得其编码基因  A map of phage A, showing the major genes. Regulator ofλ c gene or opression Phage DNA of early genes A repressor protein Stabilizer of cll protein 噬菌 ecombination y bet of late genes Excisionase OL. PL OR PR of replication proteins (for excision from Early promoters chromosome)xi and operators 体展示系统 Integrase (for integration into chromosome) A Terminase B  T4噬菌体展示系统 1.T4噬菌体病毒颗粒是在宿 主细胞内组装,被组装的 融合蛋白无需通过质膜 不需要通过分泌途径,因 而其表面展示多肽和蛋白 的范围广。同时噬菌体还 能在体外组装,这对构建 Head with 表面展示噬菌体十分方便。 packaged叭NA2.T4噬菌体展示周期在基于 Tube T4生命的非必需衣壳蛋 Sheath一 Tail fibers 白soC和HoC。 Base plate  M13噬菌体展示系统 口Ph.D.-12I噬菌体展示肽 库试剂盒将随机十二肽 融合到M13噬菌体次要衣 壳蛋白(pⅢ)上,因此 是一个组合文库。 融合蛋白模式图