原创力文档- 1、本文档共2页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
淀粉酶(AMS)测定试剂盒说明书
(碘-淀粉比色法)
原理：
淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，家人碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMS的活力。
试剂组成与配制：（100T）
1、0.4mg/ml底物缓冲液：60ml×1瓶，4℃冰箱保存6个月。
2、0.1mol/L碘贮备液：7ml×1瓶，4℃避光保存6个月。
0.01mol/L碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
操作表：
测定管（u管）
空白管（0管）
底物缓冲液（ml）37℃预温5分钟
0.5
0.5
待测样本（ml）
0.1
混匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟
碘应用液（ml）
0.5
0.5
蒸馏水（ml）
3.0
3.1
混匀，660nm波长，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。
*注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将
（空白OD-测定OD控制在0.05～0.150之间）
计算：
单位定义：100ml血清（浆）中的AMS，在37℃与底物作用30分钟，水解10mg淀粉为1个单位。
2、公式：
（此公式适用于测定血清中淀粉酶）
血清淀粉酶的含量测定
实验准备：
实验器材：移液枪（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP管、比色皿、100ml烧杯、漩涡仪、水浴箱，分光光度计、计时器。
实验药品：NaCl、蒸馏水、0.4mg/ml底物缓冲液、0.1mol/L碘贮备液。
二、实验步骤：
1、0.01mol/L碘应用液的配制：
将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
2、生理盐水的配置：
称取9gNaCl置100ml烧杯，加入100ml蒸馏水，溶解即得。
3、样品最佳取样浓度摸索：
取待测血清用生理盐水稀释成不同比例（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍等倍数进行稀释），取0.1ml进行检测。
取两个5mlEP管，标记为空白、血清所稀释的倍数，分别加入底物缓冲液0.5ml，其中带有倍数的EP管加入相应的稀释好的血清0.1ml，于漩涡仪上混匀，同时放入37℃水浴箱反应7.5分钟，取出后各加入0.5ml 0.01mol/L 碘应用液，空白管加入3.1ml蒸馏水，带有倍数的EP管加入3.1ml蒸馏水，混匀，蒸馏水调零，迅速于660nm波长测定吸光度，控制空白OD-测定OD在0.05~0.150之间。
样品测定：
将所需测定样品按摸索确定的倍数稀释，同法测定吸光度，记录数据。
数据处理：按给定公式计算待测血清淀粉酶含量。
注：加入碘应用液后不能长时间放置，否则碘见光分解后影响测定结果
文档评论（0）