化学发光检测.pptx

第一章 化学发光技术;正是临床检验界着手发展的方向。由此，我公司自 1998 年立项至今，致利于化学发光检测方案设计，自 行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半 自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件，而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临 床检验界提供了一套完善的解决方案。 二、 化学发光免疫分析技术 【概述】 本世纪 70 年代中期 Arakawe 首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析??微量 物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临 床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生 物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放 射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其 自身的发光强度直接进行测定。 化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准 化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成 为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 【原理】 在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理 同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图 1.2，1.3，1.4 所示。;化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反 应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射 出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由 此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。 具体说来，我们采用的是辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（Luminol）底物发光系统，如图 1.5 所 示。;4;5;6;7;8;9;10;11;12;游离激素含量起着贮存与缓冲作用。 与甲状腺功能密切相关的另一激素为垂体所分泌的 TSH。TSH 是由垂体前叶嗜碱细胞所分泌，它是一 种糖蛋白，分子量为 25000-28000，糖类分子占总分子量的 15%，包括岩藻糖、甘露糖、半乳糖、氨基葡 萄糖和氨基半乳糖等。 TSH 的分子是由两条肽链组成，一条是α链，由 89 个氨基酸组成；另一条是β链，由 112 个氨基酸 组成，两条肽链靠非共价键结合在一起。激素的生物学活性由肽链决定。两个亚基必须结合才具生物活性， 分开则无活性。 TSH 分泌受神经和体液的调节，包括：①下丘脑促甲状腺素释放素（TRH）的促进与靶腺激素（T3、T4） 反馈抑制的影响，二者互相拮抗，构成下丘脑腺垂体甲状腺轴；②神经系统对 TSH 分泌控制，在中枢神经 系统的控制下，生长介素可降低 TSH 分泌，多巴胺可抑 TSH 释放，雌激素可升高 TSH 基础分泌，糖皮质激 素可通过抑制 TSH 的释放，使垂体分泌 TSH 减少；③TSH 分泌受机体反应调节；④TSH 分泌有昼夜节律性 变化，高峰于午夜 23：00-24：00，上午 11：00 时最低；⑤冷刺激 TSH 分泌增加，再促进 T3、T4 分泌以 适应冷环境。 （一）甲状腺功能的调节 生理情况下，甲状腺功能有两种调节方式。即下丘脑垂体甲状腺之间的反馈性调节和甲状腺的自身调 节。第一种调节是最主要的调节方式（见图 3.1） ;14;15;脑损伤、精神病、肾脏疾病、心血管疾病等都有一定程度的甲状腺激素改变，因此测定甲状腺相关激素可 作为病情评估观察和预后判断的一种辅助指标。 （4）用于鉴别排除非甲状腺疾病 （二）推荐检测方案 人血清中多种与甲状腺功能相关的激素或抗体，如何经济有效的设计检测方案，选择合适的检测手段 是甲状腺功能检测中值得注意的问题。临床怀疑甲亢者，可按下图检查。;17;18;神经调节;剧下降，负反馈地促进下丘脑 GnRH 及垂体 LH、FSH 释放逐渐增多，刺激卵泡发育和雌激素分泌逐渐加， 子宫内膜出现增生期变化；②随着卵泡发育成熟，高浓度雌激素反而对下丘脑 GnRH 释放产生脉冲式强正 反馈调节，并进而引起腺垂体 LH、FSH 分泌高峰，诱发排卵；③LH、FSH 在排卵后迅速下降，排卵后破裂 的卵泡形成的黄体在 LH 作用下，继续分泌雌激素及大量分泌孕激素，约于排卵后一周出现雌激素的第二 次高峰及孕激素高峰，子宫内膜由增生期转变为分泌期；④若未受孕，则高雌激素水平在同时存在的孕激 素水平协同下，对下丘脑及垂体产生