微生物育种技术 项目二 菌种的复壮、单元七 工业菌种保藏技术、微生物育种技术 单元七 项目二 (1).ppt

单元七 工业菌种保藏技术 （一）目的及原理 目的：使菌种 不变异、不被污染、不死亡 保持原有的性状和生活力 尽量延长菌种的使用时间 原理 创造不利于微生物生长的一切条件，尽可能地降低微生物的生理谢，使其代谢处于休眠状态。 项目二 菌种保藏 基本原则 挑选典型菌种的优良纯种 尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 创造有利于休眠的保藏环境 尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 （二）常用保藏方法 1.斜面低温法 特点 简便易行 适合于大多数微生物 保藏时间短 易污染及退化 将需要保藏的菌种移接到斜面培养基上，放在 适宜温度下培养，当菌种长满斜面时，用牛皮 纸将试管包好，放在4℃冰箱中保藏。 2-3个月转管一次 2. 液体石蜡油保藏法 在斜面菌种上加入灭菌后的液体石蜡，用量高出斜面1cm，使菌种与空气隔绝，试管直立，置于4℃冰箱中保存。 方法简便 保存期约1-2年。 适用于不能以石蜡为碳源的菌种。 3.砂土管保藏法 将培养好的微生物(孢子、芽孢)用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物吸附在沙土载体上，将管中水分抽干后，熔封管口或置干燥器中于4-6℃的冰箱中保藏。 保藏时间长1-10年 适合于真菌和放线菌的孢子、细菌的芽孢的保藏。 4.冷冻真空干燥保藏法 是将菌种制成菌悬液，再与保护剂（如脱脂牛奶、甘油）混合，使其在-30℃以下迅速结冻，并抽真空使其中的水分升华干燥，然后在-50℃、-70℃低温下保藏。 保藏时间长10年以上。 菌种只能使用一次，不能反复冻融。 是菌种最理想的保藏方法，广泛适用于细菌、 放线菌、霉菌、酵母菌、病毒的保藏 特点 5.液氮冷冻保藏法 是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。 特点 除适宜于一般微生物的保藏外，对一些难以 保存的微生物如支原体、衣原体、噬菌体及 动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。 菌悬液加入保护剂如甘油。