病理检验技术 1.结缔组织和肌纤维染色法法 结缔组织和肌纤维 —网状纤维.pptx

病理检验技术;特殊染色;网状纤维( reticular fiber)是网状结缔组织内的一种纤维,它由网状细胞所产生。网状细胞是星状多突细胞,核大,着色较浅,核仁明显,胞质较丰富,胞突彼此连接形成细胞网架。网状纤维纤细而有分支,穿行于细胞体和胞突之间,共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨识,若用银氨液浸染后用甲醛还原能使纤维变成黑色,故又称嗜银纤维。 ;网状纤维的分布很广泛,常以两种形式存在。一种是以网状结缔组织形式分布,即有网状纤维和网状细胞同时存在。多分布于造血器官和淋巴网状器官,如红骨髓、脾、淋巴结、肝、扁桃体和胸腺,消化管和呼吸道管壁的淋巴组织内,并成为这些器官的网状支架。 ;另一种是以网状纤维单独存在,没有网状细胞伴随,见于上皮的基膜,还有平滑肌、脂肪细胞、毛细血管和神经纤维都有网状纤维包裹。 我们日常所称的网状纤维染色,主要是显示淋巴网状组织的网状纤维,因为这些组织网状纤维的增多或减少,崩解或断裂,都有助于病理组织上的诊断。而上皮基膜的完整或崩解,对一些原位癌的早期浸润有意义。 ;显示网状纤维主要是用银浸染法。银浸染技术最初是由 Bielschowsky于1904年设计用于神经原纤维的研究,后经 Maresch于1905年发展应用于网状纤维染色。以后,网状纤维染色技术就在此基础上逐步发展为各种银氨液浸染法。例如:先后有 Perdrau法、Foot法、 Gomori法、 Wilder法、 Gorden- Sweets法、 James法、 Naoumenko-Feigin法等十多种。;一般来说,氢氧化银氨液(全称氢氧化二氨合银液)是银氨液中最易被还原,容易和组织结合的一种,故一般多采用,但该液较不稳定,对光的敏感性强,故配制后易形成沉淀,易保存,需每隔1~2个月重新配制。现介绍常用的两种网状纤维染色法。 ;氢氧化银氨法(I)(改良 Gordon- Sweets);6. 酸化高锰酸钾液 0.5%的高锰酸钾1份 0.5%的硫酸1份 临用前混合后用,不能保存。 7. 2%的草酸( oxalic acid) 8. 2%的硫酸铁铵 ;9. 10%的中性甲醛液 浓甲醛( formaldehyde) 10ml 蒸馏水 90ml 碳酸钙( calcium carbonate) 加至过饱和 用时取其上清液 ;10.核固红染液 核固红( nuclear fast red) 0.1g 硫酸铝 5g 蒸馏水 100ml 麝香草酚( thymol) 50mg 取洁净三角烧瓶两只,一只盛蒸馏水30ml,稍加热至约50℃,倾入核固红,用玻璃棒轻轻搅动使溶解。另一只盛蒸馏水70ml,倾入硫酸铝,待完全溶解后与核固红液混合,持恢复至室温后过滤,再加入麝香草酚。;11. Gordon- Sweets银氨液 用小量杯盛10%的硝酸银液2ml,逐滴滴入氢氧化铵,边滴边摇动容器。先出现褐棕色的沉淀物,继续滴入氢氧化铵至所形成的沉淀物恰好溶解加入3%的氢氧化钠液2ml,再次形成沉淀,继续滴入氢氧化铵,直至沉淀物又再恰好溶解,最后加蒸馏水至40ml,配好后的银氨液用棕色滴瓶盛装,放于4℃冰箱内保存,用前取出恢复到室温使用。此液可保存1-2个月。 ;(二)染色步骤 1.组织固定于10%的甲液中,常规脱水包理。 2.切片厚4um,常规脱蜡至水。 3.把切片平置在染色架上,滴入酸化高锰酸钾液,氧化5分钟。 4.稍水洗。 5.2%的草酸漂白1~2分钟。 6.稍水洗,再用蒸馏水水洗。;7.2%的硫酸铁铵液煤染5分钟。 8.稍水洗,再用蒸馏水洗一次。 9.滴入 Gordon- Sweets银氨液作用1分钟。 10.蒸馏水稍洗。 11.10%的中性甲醛液还原1分钟。 12.流水冲洗10分钟。 13.核固红液染胞核5~10分钟。 14.稍水洗。 15.常规胶水透明,中性树胶封固。;