薄层层析析柱层析.ppt

色谱法 (层析法)  、实验目的 1、了解色谱法分离、提纯有机化合物的基本 原理和应用。 2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术  实验原理 色谱法( Chromatography)亦称色层法、 层析法等。 章色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重 要方法之 章色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某 物质中的吸附或溶解性能(分配)的不同, 或其亲和性的差异,使混合物的溶液流经该 种物质进行反复的吸附或分配作用,从而使 各组分分离。  色谱法须在两相系统间进行。一相是固定相, 需支持物,是固体或液体。另一相为流动相 是液体或气体。当流动相流经固定相时,被 分离物质在两相间的分配,由平衡状态到失 去平衡到又恢复平衡,即不断经历吸附和解 吸的过程。随着流动相不断向前流动,被分 离物质间出现向前移动的速率差异,由开始 的单一区带逐渐分离出许多区带,这个过程 叫展层。  分类 按层析的机理划分: 吸附层析、分配层析、离子交换层析、 凝胶过滤层析、亲和层析等。 吸附层析:利用吸附剂表面对不同组 分吸附性能的差异,达到分离鉴定的目的。 分配层析:利用不同组分在流动相和 固定相之间的分配系数不同,使之分离 离子交换层析:利用不同组分对离子 交换剂亲和力的不同。 凝胶层析:利用某些凝胶对于不同分 子大小的组分阻滞作用的不同。  按流动相与固定相的不同划分: 气相色谱(层析)、液相色谱(层析)。 这两大类层析是以流动相不同来划分 的。 如同时区分流动相和固定相,划分为:气 固层析、气液层析、液固层析和液液层析 等  世一按操作形式划分: 柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层 析等 桂层析:将定相装于柱内,使样品沿一个 方向移动而达到 离 纸层 用滤纸做液体的载体,点样后,用 流动相展开,以达到分离鉴定的目的。 将适当粒度的吸剂铺成薄 法进行物质的分离和签定。 以上划分无严格界限,有些名称相互交 叉,如亲和层析应属于一种特殊的吸附层析 纸层析是一种分配层析,柱层析可做各种层 析。  吸附色谱主要是以氧化铝、硅胶等为吸附剂 将一些物质自溶液中吸附到它的表面上,而 后用溶剂洗脱或展开,利用不同化合物受到 吸附剂的不同吸附作用,和它们在溶剂中不 同的溶解度,也就是利用不同化合物在吸附 剂上和溶液之间分布情况的不同而得到分离 吸附色谱分离可采用柱色谱和薄层色谱两种 方式。  (一)柱层析法 1原理 流动相流过时各组分会以不同的速率向下移动,吸 附弱的组分以较快的速率向下移动。随着流动相 的移动,在新接触的固定相表面上又依这种吸附 溶解过程进行新的分配,新鲜流动相流过已趋 平衡的固定相表面时也重复这一过程,结果是吸 附弱的组分随着流动相移动在前面,吸附强的组 分移动在后面,吸附特别强的组分甚至会不随流 动相移动,各种化合物在色谱柱中形成带状分布 实现混合物的分离。  几种层析柱 图1. PrOes HPLC 画m 图3. BioProcess HPLc层析相 图2.Ln-比oes公司的油罐