紫外光度法测定维生素C实验报告.pdfVIP

紫外分光光度法测定维生素 C片维生素 C 的含量 一、实验目的 1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法； 2.熟练紫外 -可见分光光度计的操作。 二、实验原理 维生素 C （VC ）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构， 分 D 和 L 两种立体构型， 但只有 L 型有生理功效。 维生素 C 具有较强的还原性 , 在一定条件下氧化型和还原型可以互变 ,两者均具有生物活性 (结构式见图 1),其 + C2 和 C3 位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出 H ,故维生素 C 虽然不含 自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素 C 呈无色无臭的片状结晶体 ,易溶于水 , 不溶于脂。在酸性环境中稳定 ,遇空气中氧、热、光、碱性物质 ,特别是有氧化酶 及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。 具有 π电子的共轭双键化合物、 芳香烃化合物等， 在紫外光谱区都有强烈吸 4 6 收，其摩尔吸收系数 k 可达 10 -10 数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析， 要借助朗伯 -比尔定律。 根据维生素 C 在稀硫酸溶液 （维生素C 水溶液在 pH 5～ 6 之间稳定）中，在 245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法 测定维生素 C 片含量的方法。 三、实验仪器及试剂 实验仪器：容量瓶（ 100 ml、1000 ml）、移液管（ 0.5 ml 、5 ml ）、烧杯、紫外 分光光度计 实验用品：98%浓硫酸 （分析纯，1.84 g/ml）、维生素 C 对照品系以原料药经 105 ℃ 干燥至恒重（含量为 99.7 %）、维生素 C 片（2 片）、去离子水 四、实验步骤 -1 硫酸溶液的配制 1. 0.005 mol L · 用 0.5 ml 移液管移取 0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中， 搅拌，冷却至室温后移入 1000 ml 容量瓶，稀释至刻度，待用。 -1 2. 0.5 g L · 对照品溶液的配制 精密称取 105℃ 干燥至恒重的维生素 C 对照品 50 mg 置 100 ml 量瓶中， 加 -1 -1 硫酸溶液制成 0.5 g L· 0.005 mol L· 对照品溶液。 3. 维生素 C 对照品标准溶液的配制 -1 用 5 ml 移液管精密量取 0.5 g L·对照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分 -1 别置 100 ml 量瓶中，用 0.005 mol L·硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。 4. 测定波长及标准曲线 -1 以0.005 mol L· 硫酸溶液为空白，测定维生素 C在稀硫酸溶液中最大吸收波 长，并在此波长处测定维生素 C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作线 性回归。 5. 样品含量测定 取维生素 C片2片，精密称定，研细，精密称取适量（ 0.06g，约相当于维生 -1