SDSPAGE实验焦庆昉邓小园.pptVIP

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;实验目的;实验原理;蛋白质N端游离氨基，C端游离羧基以及侧链上一些基团在一定pH条件带电荷， 因此可以用电泳技术分离和鉴定; ; ;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。;这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小;影响电泳速度的因素;实验材料和仪器;;;;;;;;实验步骤;2.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干，把玻璃板在灌胶支架上固定好 ; ;按比例配好分离胶,用移液管快速加入，直至距样品模板梳齿下缘1cm,之后加少许蒸馏水约3~4mm。凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面。; ; ;5.倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干,按比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处。;6.迅速插入样梳,静置40分钟; ; ;7.在上槽内加入缓冲液，拔出样梳后, 整理上样槽;8.点样。 分别取待测蛋白100μl，再分别加入900μl 样