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细胞培养技术及常见问题 复旦大学附属中山医院 中国生物医药技术服务中心  ※实验室细胞培养技术 细胞培养的设备条件 无菌室密闭性好,方便消毒;干燥透气,但工 作时和外界无空气对流 超净工作台 ·CO2培养箱定期清洁消毒,保持湿度。 培养器皿的清洗与消毒浸酸6小时以上→流水 冲洗15次→双蒸水浸洗3次→烘干、包装→消毒。  二、培养基基本要求 营养成分 氨基酸12种必须氨基酸,或需要添加谷氨酰胺。 ·单糖葡萄糖吸收最高,半乳糖最低。神经元培养 需另外添加 维生素 无机盐及微量元素 促生长因子和激素 3、渗透压260~320mOsm/kg范围内都适宜。 4、PH7.2~7.4 5、必须使用三蒸去离子水  6、血清牛血清适用于大多数哺乳类动物细胞 可分为:小牛血清、新生牛血清、胎牛血清 质量标准可向厂家索取质检报告 次总蛋白含量:不低于35-45g/ 大球蛋白含量:20gL,越低越好 大血红蛋白含量:越低越好 外观:土黄或棕黄色,清凉透明,无或少许沉 淀,粘稠。 大大量沉淀物:污染或蛋白变性 大颜色为棕红色:血红蛋白含量高,有溶血 ★液体稀薄:掺入的生理盐水过多  储存和使用 热灭活高质量的胎牛血清不必热灭活,但 培养ES细胞、平滑肌细胞时建议热灭活 分装为小包装,储存于-20°C,避免反复冻 融 大使用浓度,