中国药品检验标准操作规程2010版细菌内毒素检查法.pdf

细菌内毒素检查法 1 简述 1. 1 本规范适用于《中国药典》 2010 年版二部附录Ⅺ E 争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 1. 2 供试品细菌内毒素限值的确定 1. 2. 1 药典中或国家标准有规定的，按供试品各论中规定限值； 1. 2. 2 尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值： L ＝ K ∕M 式中 L 为供试品的细菌内毒素限值，以 EU ／ml 、 EU ／mg 、 EU ／U K 为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以 其中注射剂， K ＝5EU ／(kg ·h) ；放射性药品注射剂， K ＝2. 5EU ／(kg · (kg ·h) 。 M 为人用每公斤体重每小时最大剂量，以 ml ／(kg ·h) 、 mg ／(kg · 药品人用最大剂量可依据药品使用说明书或参阅《临床用药须知》 射时间小于 1h 的按 1h ２ ２ 换为每千克体重剂量［即 M ： （最大给药剂量／ (m ·h) × 1. 62m ）／ 1. 3 供试品最大有效稀释倍数的确定 供试品的最大有效稀释倍数（ MVD ）按下式计算： 2. 2 电热干燥箱用于去除外源性内毒素，温度应能达到 250 ℃。 2. 3 恒温水浴箱或适宜的恒温器（ 37 ℃± 1℃）。 2. 4 水银温度计或酒精温度计，精度在 1℃以下。 2. 5 旋涡混合器。 2. 6 鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号。 2. 7 品检定所统一发放的标准品。 2. 8 细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于 0. 015EU ／ml 于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。 2. 9 实验用具 移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头） 角瓶、试管、试管架、洗耳球、封口膜、时钟、 75 烤 30 对试验无干扰的器械。 2. 10 细菌内毒素光度测定仪器。 3 实验准备 3. 1 玻璃器皿的洗涤 金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入电热干燥箱。 3. 2 玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素的去除 待干燥箱温度升至设定的温度后开始计时， 250 ℃干烤 30 进行鲎试剂灵敏度复核试验。 4. 1. 1 实验操作 4. 1. 1. 1 细菌内毒素标准溶液的制备 轻轻划痕， 75 ％乙醇棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落人瓶内。 涡混合器上混合 15min 。然后进行稀释，制备成 4 0. 25 λ（ λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度） 请参见标准品使用说明书） 。 菌内毒素工作标准品，为一次性使用。 4. 1. 1. 2 待复核鲎试剂的准备 取规格为 0.1ml ／支的鲎试剂 18 棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入 0. 1ml 充分溶解，避免产生气泡。若待复核鲎试剂的规格不是 0.