菌种保藏原理和方法.pptVIP

哈尔游学院 第一节菌种的衰退与复壮 衰退( degeneration):黄种在培养或保巖 过程中,由于自发突变的存在,出现某些原有优 良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象,称 为黄种的衰遇。 衰退的原因 核基因突变 1、基因突变 (根本原因) 质粒脱落  哈尔游学院 2、连续移代(加速退化的直接原因) 亳3-12产苷的冀哪呤缺陷型热在接弹传代过中声量和回皇子量闯学 实验参代数 每代面春时间(天)|复我旅就 /4.5X10° Ii 47.3,9,3,71 l/2.x10 3403 47,3,9,3,i3,8,3,47,41/6.3810 3,9.3,13,8.3,4,14,6,6,311/1.0x 3、培养和保藏条件的影响  哈尔游学院 韦见的衰退现象: 蔺落和细胞形态的改叟 生长速度缓慢,产孢子越来越少 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降; 二、衰退的防止 防止菌种衰遇的方法: ①控制传代次教(一般在DNA的复制过程中,碱基的错 配率是5×104,自发突变的频率为103~10°,采用良好的 菌种保藏方法,可以减少移种和传代的数) ②选掛合逅的培养条件; ⑦釆用不同类型的细胞进行传代(对丝状微生物而言 通常采用稳定的单核孢子进行接种) ④釆用有效的菌种保菔方法  哈尔游学院 三、菌种的复壮 菌种的复壮( rejuvenation):使衰退的菌种 恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发 生衰退的情况下,通过纯种分离和生产性能测定 等方油,从衰退的群体中找出来衰退的个体,以 达到恢复诚菌原有典型性状的措施;广义的复壮 是指在菌种的生产性能来衰退前就有意识的经常 进行纯种的分离和生产性能测定工作,以期菌种 的生产性能還步提高。实际上是利用自发突变 (正变)不断地从生产中选种  哈尔游学院 菌种的复壮措施 ①纯种分离:(平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等) ②通过寄主体内生长进行复壮 ③淘汰已衰退的个体(采用比较激烈的理化条件进行处理,以杀死生命力较 差的已衰退个体) ④采用有效的菌种保藏方法  哈尔游学院 第二节工业微生物菌种的保藏 日的 ①存活,不丢失,不污染 ②防止优良性状丧失 ⑦随附为生产、科研提供优良菌种 原狸:选用优良的纯种,(最好是休颩体,如分生孢子 芽胞等),创造降低微生物代谢活劲强度,生长繁殖受抑制 唯以发生突变的环境条件。(其环境要素是干燥、低、缺氧 缺营养以及添加保护剂等)  哈尔游学院 菌种保藏的方法 连续在培养基上(内)移种 菌种保藏方法 生活态传代培养保藏法1连续在活宿主上(内)移种 固体斜面 湿法半固体琼脂柱 休眠态」 液体介质(蒸馏水、糖液、其它溶液) 干法∫藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上  哈尔游学院 、冷冻保藏法 方法:菌种管低温保藏,定时传代 原理:低温下,微生物代谢强度明显下降 冷冻保菔为保藏微生物菌种的最简单而有效的 方法。 通过冷冻,使微生物代谢活动停止。一般而言 冷冻温度愈低,效果愈好。为了获得满意的冷 冻结果,通常应在培养物中加入一定的冷冻保 护剂。冷冻保藏时温度要求在-20°C以下,同 时应认真幸握好冷冻速度和解冻速变 冷冻深藏的缺点之一是培养物运输较因难。  哈尔游学院 冷冻保蒇种类 ①普通冷冻保蒇技术(20℃C) ②超低温冷冻保藏技术(-60--80℃) ③液氮冷冻保藏技术  哈尔游学院 普通冷冻保藏技术(-20℃) 将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞分接 到试笞或指答肉,然后贮菔于一冰箱的冷室中, 或于温度范围在-5~-20°℃C的普通冰箱(20C)中。 或者,将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上,待 生长适度后,将试管或瓶口用橡胶塞严格封好,同 上置于冰箱中保存。 用此方法可以维持若干微生物的活力1—2年。