单克隆抗体的制备流程.pdfVIP

. 单克隆抗体的制备流程 （一）动物的选择与免疫 1．动物的选择 纯种 BALB/C 小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排 污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种 BALA/C 小鼠。 2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功， 获得高质量的 McAb 至关重要。 一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫， 免疫方案应根据抗原 的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐 剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。 初次免疫抗原 1～50 μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般 0.8～ 1ml,0.2ml/ 点） ↓3周后 第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或 ip （腹腔内注射） （ip 剂量不 宜超过 0.5ml ） ↓3周后 第三次免疫剂量同一，不加佐剂， ip （5～7 天后采血测其效价） ↓2～ 3 周 加强免疫，剂量 50 ～500 μg为宜， ip 或 iv （静脉内注射） ↓3天后 取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：① 将可溶性抗原颗粒化或固相化， 一方面增强了抗原的免疫原性， 另一方面可降低抗 原的使用量。 ②改变抗原注入的途径， 基础免疫可直接采用脾内注射。 ③使用细胞 因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。 （2 ）颗粒抗原免疫性强， 不加佐剂就可获得很好的免疫效果。 以细胞性抗原为例， 7 免疫时要求抗原量为 1～2 ×10 个细胞。 初次免疫 1×107/0.5ml ip ↓2～3 周后 第二次免疫 1×107/0.5ml ip ↓3周后 加强免疫（融合前三天） 1×107/0.5ml ip 或 iv ↓ 取脾融合 （二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择： 骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系， 这样杂交融合率高， 也便于接种杂交瘤在同一 品系小鼠腹腔内产生大量 McAb 。 （2 ）饲养细胞：在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖，若加入其它活 细胞，则可促进这些细胞生长繁殖，所加入的这种细胞数被称为饲养细胞。在制备 McAb 的过程中，许多环节 需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中， 加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞（较为常用） 、小鼠脾 1 / 4 . 脏细胞或胸腺细胞。也有人用小鼠成纤维细胞系 3T3 经放射线照射后作为饲养细胞。饲养 4 5