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实验五 培养基的配制 （基础实验， 4 学时） 一、实验目的和要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮 源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌， 一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。 牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用 于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏 0.3g,蛋白胨1g, NaCI 0.5g，水100ml，琼脂1.5? 2.0g，pH 7.2 ?7.6 三、实验用具 高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、 500ml 刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、 量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCI、琼脂、1mol/L NaOH、 1mol/LHCl 四、实验步骤 1、 称药品 按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量， 热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。 2、 溶解 在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入 琼脂，熔化后补充水至所需量。 3、 调pH 用1mol/L NaOH和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。 4、 分装 液体培养基分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜，三角瓶不超过容积的一半 为好，固体培养基v试管高度的 1/5，灭菌后制成斜面。 5、 加塞 用棉花制作塞 6、 包扎 三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试 管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。 7、 灭菌 0.103MPa , 121 C，湿热灭菌 20min。 8、 摆斜面 趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的 1/2。 9、 平板制作 灭菌后冷至50C?60C，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中， 平皿制好后通常倒置 10、 无菌检查 将灭菌的培养基放在 37C恒温箱中培养 24?48h，无菌生长可使用。 六、注意事项 1、 分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 2、 称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。 七、思考题 高压蒸汽灭菌器如何使用？ 精选文档