发酵生产技术 电子教案 项目四--2.pptVIP

任务4. 染菌及防治 一、 染菌的危害二、 染菌的检查 三、 染菌的原因及其分析 四、 染菌的处理(挽救) 五、 染菌的防治 一、染菌（杂菌污染）的危害 （一）什么是染菌？ 感染了对正常发酵有影响的其他微生物或噬菌体，或称“污染”。即除了正常生产菌之外，还有“不速之客”---杂菌。 杂菌： 是指在发酵基中侵入了有碍生产的其他微生物。 范围：实验室种、种子罐、发酵罐。 发酵的种类：固态发酵、液态发酵。 （二）染菌的危害 发酵过程污染杂菌，会严重的影响生产，是发酵工业的致命伤。 对发酵的影响→发酵异常； 对产物的影响→提取、外观、质量； 对生产的影响→导致生产率↓或“倒罐”， 染菌的危害——造成经济损失 直接经济损失 原材料损失、产率下降等 间接经济损失 提取成本升高 发酵染菌的废液，生物需氧量（BOD）增高，对环境污染加大，增加三废治理费用和时间。 增加灭菌成本等。 二、 染菌的检查方法 从四个方面进行： 1）显微镜检查 2）无菌试验 3）生理生化指标的变化 4）试剂盒检测 （一）杂菌的检查方法 P110 （1）显微镜检查：染色 镜检 无法发现染菌初期的杂菌，为什么？ （2）无菌试验 取样1次/8h；检查1次/6h ①平板划线检查（双碟法）： 倒平板 空培养 待测样品划线 培养观察 ②酚红肉汤培养检查：无菌肉汤培养基空培养 接入样品 培养观察 （3）通过发酵的生理生化指标检查 （4）试剂盒检验法 根据某些参数的异常变化来判断是否染菌。 降糖速度、温度变化情况 如果发酵前期温度上升剧烈，说明什么？ 说明有可能染菌 产酸速度（ pH值） 溶解氧（DO值），即 O2的消耗情况 光密度（OD值），即菌体浓度的变化 排气中CO2含量 产物含量 泡沫：当感染杂菌和噬菌体时，泡沫异常多 选择题 1.发酵中出现溶氧异常下降，可能有下列哪些原因引起？ A、污染好气性杂菌??? B、菌体代谢发生异常现象??? C、 某些设备或工艺控制发生故障或变化??? D 、 A+B+C 2.发酵中出现溶氧异常升高，不可能有下列哪些原因引起？ A、污染好气性杂菌??? B、菌体代谢发生异常现象??? C、 某些设备或工艺控制发生故障或变化??? D 、污染烈性噬菌体 判断题：污染烈性噬菌体会引起溶氧异常下降。（ ） （二）各种检查方法的比较 显微镜检查方法简便、快速，但由于镜捡取样少，视野的观察面也小，因此不易检出早期杂菌。 平板划线法和肉汤培养方法的缺点是需经较长时间培养(一般要过夜)才能判断结果，且操作较繁琐，但它要比显微镜能检出更少的杂菌，而且结果也更为准确。 生理生化指标检查可及早发现与预测染菌，但需建模。 试剂盒检验法快速、高效、专一性强 检查的一般时间或工序见下表 三、杂菌检查总的原则:每个工序或经一定时间都应进行取样检查。P110 （四）杂菌检查中应注意的问题（原则） “实验为主，镜检为辅”——即检查结果应以平板划线和肉汤培养结果为主要根据， 平板划线和肉汤培养应做三个平行样； 要定时取样、定时观察；取样1次/8h；检查1次/6h 酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小时，确定为无菌时方可弃去 要严格的无菌操作，取样时防止外界杂菌混入的措施。 五、染菌率的计算 “防重于治” 首先必须消除人为因素： 造成染菌的因素很多，但总结几十年的经验，对绝大部分罐批染菌的原因是比较清楚的，但在实际生产中发酵染菌率仍比较高，可以说产生这种现象大多数是由于工作中“明知故犯”“不负责任”和“侥幸心理”所造成的。例如，灭菌的蒸汽压不足不能灭菌；设备有渗漏不能进罐等等都是众所周知的，但因为有侥幸心理还是照样灭菌，进罐，结果以污染杂菌而告终。 技术管理不善：不能有侥幸心理而放松管理 案例分析：讨论 （一）染菌的主要途径（原因） 杂菌侵入的途径在工业上不外乎原料、菌种、空气、设备、补料等五个方面 1 . 原料方面：灭菌不彻底 2 . 种子方面：种子带菌 3 . 无菌空气：空气带菌 4 . 设备方面：设备渗漏 5. 中间补料系统：补料或管路带菌 染菌的主要途径 （二）染菌原因分析——1.染菌的幅度 1）发酵早期染菌：可能是 ◆种子带菌； ◆培养基灭菌不彻底， ◆ 设备有“死角”，清洗不干净而染菌。 2）发酵中后期染菌：可能是 ◆无菌空气 ◆中间补料带入杂菌 ◆发酵设备渗漏 ◆操作不合理逐渐侵入杂菌而造成的