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. 过氧化氢酶 (CAT)试剂盒说明书 一、测定原理： 过氧化氢酶 (CAT) 分解 H2O2 的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的 H2O2 与钼酸铵 作用产生一种淡黄色的络合物，在 405nm 处测定其变化量，可计算出 CAT 的活力。试剂一 (ml) 二、试剂组成与配制： 试剂一：液体 100 ml ×1 瓶， 4℃保存 6 个月。 试剂二：底物液体 10 ml ×1 瓶， 4 ℃保存 6 个月。 试剂三：显色粉剂 ×1 瓶， 4 ℃保存 6 个月。加双蒸水至 100 ml 溶解， 4 ℃保存 1 个月。 （如 果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果） 试剂四：液体 10 ml ×1 瓶， 4℃保存 6 个月。天冷时会凝固，临用前 37℃水浴至透明方可使 用。 三、组织样本的检测 1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量 (g) ：体积 (ml)=1 ：9 的比例加入 9 倍体 积的生理盐水， 冰水浴条件下， 制备成 10%的组织匀浆， 2500 转/ 分离心 10 分钟， 取上清， 再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测 (最佳取样浓度摸索减附录 )。 2、操作表： 对照管 测定管 组织匀浆 (ml) 0.05 试剂一 (37℃预温 )(ml) 1.0 1.0 试剂二 (37℃预温 )(ml) 0.1 0.1 混匀， 37℃准确反映 1 分钟（ 60 秒） 试剂三 (ml) 1.0 1.0 试剂四 (ml) 0.1 0.1 组织匀浆 (ml) 0.05 混匀，波长 405nm ，光径 0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做 1-2 管对照即 1 / 2 . 可。如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至 48 样。 3.组织中 CAT 活力的计算： （1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解 1umol 的 H2O2 的量为一个活力单位。 （2 ）计算公式： 组织匀浆中 * 1 CAT 活力 (U / mgprot ) (对照 OD 值 - 测定 OD值 ) 271 待测样本蛋白浓度 (mgprot / ml) 60 取样量 注： *271 为斜率的倒数 （3 ）计算举例： 取 10%水稻叶片匀浆 0.05ml 做 CAT 检测，测得对照管吸光度为 0.605 ，测定管吸光度为 0.332， 同时测得 10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为 3.1303 mgprot/ml 。则计算结果为： 1 组织匀浆中 CAT