基因测序技术进展.docVIP

第二节 基因测序技术进展 基因测序技术处于不断更新换代阶段，它的发展是推动基因组学发展的中坚力量。回顾基因测序技术的发展变迁，大致可以分为三代，即第一代测序技术、第二代测序技术和第三代测序技术。 一、第一代基因测序技术 传统的化学降解法、双脱氧链终止法以及在它们的基础上发展来的各种DNA 测序技术，如荧光自动测序技术、杂交测序技术，统称为第一代DNA 测序技术。第一代基因测序技术曾经在分子生物学研究中发挥过重要的作用，如人类基因组计划的完成主要基于第一代基因测序技术。 （一）化学降解法 化学降解法是根据某些化学试剂可以使DNA 链在特定的一个碱基或两个碱基处发生专一性断裂的特性，对待测DNA 末端进行放射性标记，通过5 组（或4 组）相互独立的化学反应分别得到部分降解产物。由于每一组反应特异性地针对某一种或某一类碱基进行切割，因此，在反应后可得到5 组（或4 组）长短不一的放射标记的DNA 片段。每组中每个DNA 片段都有放射性标记的共同起点，但DNA 片段的长度取决于该组反应针对的碱基在原DNA 片段上所处的位置。最后，各组反应物通过聚丙烯酞胺胶电泳进行分离，再通过放射自显影检测末端标记的分子，即可直接读取待测DNA 片段的核昔酸序列闭。因为化学降解法所测序列来自原DNA 分子而不是酶促合成产生的拷贝，所以排除了合成时造成的错误。化学降解法在问世之初，凭借较高的准确性，且较易为