大肠杆菌分离和培养过程.ppt

大肠杆菌的分离和培养过程;结构简单，个体微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到。 包括病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物等。 ; 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 ;(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐;3.培养基内所需的其他条件;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 ;　;（1）灼烧灭菌;（2）干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。 ;以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手;（一）培养基的配置与灭菌;1、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 ;3、用左手的拇指和食指将培养皿打开一条的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10-20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 ;1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度？;（三）大肠杆菌的扩大培养;平板划线的操作;3、将试管口通过火焰。 ;6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平等线，盖上皿盖。 注意不要划破培养基。 ;7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域划线。 重复以上操作，在三、四、五区域内划线。 注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 ;分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。 ;注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2.划线首尾不能相接。 3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。 ;问题 讨论;2.在进行第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？;是指将培养的菌液稀释一定的倍数，然后取一定量稀释液加在固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上。 ;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;（五）大肠杆菌分离后保??;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;4.实验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理？;5.如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?