(完整版)细菌培养技术.docVIP

第二节 细菌培养 检测技术 节概述 细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。  大多数细菌均可用人工方法培养，  只有将细菌 培养出来才能对它进行研究和鉴定 知识点导航 一 .培养基的种类 培养基（ culture medium ）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养 基 能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、 选 择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。 （一）基础培养基 只含有细菌生长所需的最基本营养成分， 应用最广泛， 为制备多种培养基的基础， 常见的有 肉 汤培养基、琼脂培养基。 （二）营养培养基 在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的 细 菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。 （三）选择培养基 利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成， 使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长 的 培养基。 培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳， 有利于目的菌的检出和识 别 。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。 （四）鉴别培养基 培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等， 用于检查细菌的各种生化反应， 以资 鉴 别和鉴定细菌。 （五）厌氧菌用培养基 专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长， 故需在培养基中加入半胱氨酸、 硫乙醇酸钠等还原剂， 降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。 （六）特殊培养基 为某些需要在特殊条件下才能生长的基、改良 Kagan 氏培养基等。  细菌培养 之用。如高渗盐增菌培养基、  高渗糖增菌培养 二 .培养基的制备 制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整 pH 、过滤、分装、灭菌及检 定和 保存。 三 .细菌检验室的注意事项及无菌技术 细菌培养 必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作， 即无菌操作。 细菌检验室的注意 事 项如下： ．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。 ．用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。 ．从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上 通过 2～ 3 次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。 4 ．如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用 3％来苏 或 5％ 石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡 30 分种。 5 ．工作完毕后，用紫外光灯照射 30 分钟，或用 3％来苏擦拭台面，并清洗双手。 四、接种环和接种针使用 接种环和接种针由三部分组成，即环（针）部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种 针 通常选用电热 （镍）丝，环的直径随使用目的而不同， 一般多为 2～ 4mm ，环和针的长度为 40 ～ 50mm 。 接种环 （针） 使用前后均应进行灭菌处理， 将接种环 （针）末端直立火焰中， 烧红镍丝部分， 再使接种环 （针） 金属柄旋转通过火焰 3 次灭菌， 冷却后用以取菌或待试标本。 使用接种环 （针） 完 毕后立即将染菌的镍丝部分于还原焰（内焰）中加热，烤干环（针）端附着的细菌或标本，以免 环 （针）上残余的细菌或标本因突受高热，爆烈四溅，而污染环境和导致传染危险。然后再移于氧 化 焰（外焰）中烧红灭菌，最后将金属柄部分往复在火焰中通过 3 次。用完后的接种环（针） ，应立即 搁置于架上，切勿随手弃置，以免灼焦台面或其他物件。 五、接种操作区 为避免在接种过程中污染环境以及空气中的细菌污染培养物， 接种均应在接种罩或无菌室内 进 行，此外细菌学实验室所必需的设备还包括无菌工作台、生物安全柜和生物安全实验室。 （一）接种罩 接种罩的式样很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有机玻璃制成。接种罩在 用 前先以 3％石炭酸或来苏轻拭，内需装有紫外线杀菌灯，用前可先行照射，以保证罩内无尘埃和 细 菌。操作结束后，应立即清理内部，并作罩内消毒处理。 （二）无菌工作台 又称超净工作台（ super clean bench 式。通过变速离心风机将负压箱内经过预滤器过滤的空气压入静压箱，  ），目前多采用垂直层流的气流形 再经高效过滤器进行二级 过 滤，从出风面吹出的洁净气流，  以一定的和均匀的断面风速通过工作区时，  将尘埃颗粒和微生物 颗 粒带走， 从而形成无尘无菌的工作环境。  使用时应提前  50 分钟打开紫外线杀菌灯，  30 分钟后关 闭并 启动送风机。净化区内严禁存放不必要的物件，以保持洁净气流型不受干扰。 （三）无菌室 无菌室又称洁净室（ clean room ），是在实验室内部安装的用于无菌操作的