核酸扩增技术在结核病诊断中的应用与进展.docxVIP

核酸扩增技术在结核病诊断中的应 用与进展 近10余年来现代分子生物学的迅猛发 展，为临床实验室诊断提供了较为可靠的核 酸检测方法。经典聚合酶链反应 (PCR)扩增 技术已广泛应用于结核病的诊断；然而，由 于污染问题严重，扩增抑制物的存在，试剂 盒缺乏规范化、标准化，加之技术、条件、 质控等方面因素影响，其敏感性、特异性差 异颇大，人们对其可信度、可靠性产生了怀 疑，给临床医生诊断结核病带来了一定的困 惑。为此，国外学者开发出具有高度敏感性、 特异性、标准化、商品化的PCFT增试剂盒； 继PC江后，又发展了几种新的核酸体外扩 增技术。现就其在结核病诊断方面的应用与 进展作一介绍，供广大同道借鉴。 一、PCF^基础扩增反应即 Roche Amplicor结核分支杆菌PCR式验(Amplicor pCR) Amplicor PCFF^应用生物素标记位于结 核分支杆菌16S rRNA基因中高度保守区域 种特异性引物扩增结核分支杆菌复合群 DNA 中584 bp序列；生物素标记的扩增子 （amplicon）与种特异性DNA^针进行杂交后， 应用标准酶联免疫技术进行比色鉴定， 结果 判断以450 nm波长时吸光度（A450） ＞为阳 性标准［1?3］。Amplicor pCR 是由瑞士 Roche公司开发研制的标准化、商品化试剂 盒，该试剂盒有三个不同的小盒：标本处理 盒、扩增盒和鉴定盒。为防