LB培养基怎样配制.pdf

。 LB 培养基怎样配制 LB一般被解释为 Luria-Bertani ，然而根据其发明人贝尔塔尼 (Giuseppe Bertani) 的说法，这个名字来源于英语 lysogeny broth ，即溶菌肉汤。 LB 培养 基是近年来用于培养基因工程受体菌 ( 大肠杆菌 ) 的常用培养基之一。 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培 养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和 NaCl。 酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物 酶解的富含小分子的氨基酸、 肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末， 其中氨基酸含量 30%以上，总蛋白 50%以上，核苷酸 10%以上，广泛用作生物培 养基和食品调味品制造原料。 胰化蛋白胨： 一种优质蛋白胨， 是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化， 浓缩干燥 而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。 酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等 ; 蛋白 胨主要提供氮源 ;NaCl 主要提供微生物生长环境 ( 如渗透压 ) ，其次是提供无机 盐。 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在 40 ℃时凝固，通常不被微生物分解利用。 固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质 量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其 pH调至中性 或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基配方 ( 每升 ) 酵母提取物 5g 胰化蛋白胨 10g 氯化钠 10g NaOH调 pH至 7.0 ，121℃、20min 高压灭菌。 LB 固体培养基 LB培养基 1L 琼脂粉 15g 精选资料，欢迎下载 。 NaOH调 pH至 7.0 ，121℃、20min 高压灭菌。 有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为 40 ℃，所以添加抗生素最好 在 50～55℃。 LB培养基用途： 用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。 LB培养基使用原理： 蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、 维生素和生长因子 ; 氯化钠维持均衡的渗透压 ; 葡萄糖提供碳源 ; 琼脂是培养基的凝固剂。 LB培养基配制方法 配制每升培养基，应该在 950 ml 去液态 lb 培养基离子水中加入：胰化蛋白 胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用 5mol/LNaOH调 pH 至 7.0 。用去离子水定容至 1L。在 15psi 高压下蒸汽灭菌 20min 。 1.LB 固体培养基 1L 和液体一样，加 15g 琼脂粉，一定要在温度降下之前加 好抗固态 LB 培养基生素，并且倒好板。 LB 固体培养基倒板 1。配制： 100mlLB 培养基加入 1.5g 琼脂粉 2. 抗生素的加入： 高压灭菌后，将融化的 LB 固体培养基置与 55℃ 的水浴中， 待培养基温度降到 55℃时( 手可触摸 ) 加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失 效，并充分摇匀。 3. 倒板：一般 10ml 倒 1 个板子。培养基倒入培养皿后，打