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植物组织培养实验报告 一 实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为 有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二 实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能 够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化 停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为 “脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及 根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲 哚乙酸（ IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（ 6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三 实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ， 4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超 净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三 实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在 MS 培养基中按表 33 – 1 加入 IAA 和 6–BA 。 吲哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中， 每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后 在高压灭菌锅中 121 ℃ （1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上， 1 冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭 菌。 3. 诱导产生愈伤组织 （1 ）取健壮的玫瑰、菊花茎数段，每段约 5 cm 长，于烧杯中用 0.1% 氯化汞（升汞） 浸泡 20 min ，取出用无菌水洗 3 ～ 4 次，置于无菌培养皿中，在接种箱中按无菌操作 要求剥去外皮（接种箱事先用紫外灯灭菌 30 min ），用解剖刀切成 5 mm 厚的圆片（弃 去开始一片和最后一片），用长镊子将它接种在诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基， 每瓶接种 4 片，接种后扎好瓶口。 （2 ）将已接入植物组织（外植体）的三角烧瓶，培养在 25 ℃温室中，每星期检查 l ～ 2 次，剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶， 3 ～ 4 周后产生愈伤组织。 （3 ）选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶，用解剖刀将愈伤组织切下，转移到含有不同激 素的试验培养基中（也可以连同原来的外植体一起转移），每瓶放 1 ～ 2 块，仍培养在 25 ℃温室中，每周 1 ～ 2 次观察不同处理的三角烧瓶中，愈伤组织分化情况，直至长出 根和芽。长成的幼小植株即为“试管苗”，可移栽于花盆中。 四 实验结果 因为时间有限及实验严密性等问题，大部分都失败了，但是仍然有小部分分化发育了出 来。已经证明了植物组织能够经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织 又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 2