核酸分离纯化-经典版剖析教学提纲.pptVIP

核酸分离纯化-经典版剖析;一、核酸分离、纯化原则;2. 实验过程中，应注意以下条件及要求： 1）减少化学因素对核酸的降解:pH4-10 2）减少物理因素对核酸的机械剪切力：0-4?C 强烈振荡、搅拌，细胞突置于低渗液中，细胞裂解，反复冻贮等造成的机械剪切力等条件都能明显破坏大分子量的线性DNA分子，对于分子量小的环状质粒DNA及RNA分子，威胁相对小一些；另外如高温加热，除高温本身对核酸分子中的化学键的破坏作用外，还可能因煮沸带来液体剪切力，因此核酸提取常常在0～4℃的条件下进行。 ; 3）抑制DNase或RNase的活性： 所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。 4）简化步骤，缩短时间，减少破坏。;3.DNA酶抑制剂;4.RNA酶（RNAase)抑制剂;(2) DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5) 粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。 作用机制：与蛋白质中His结合使蛋白变性。;（3) 肝素 （4）复合硅酸盐（Macaloid) （5）RNase阻抑蛋白（RNasin） （6）氧钒核糖核苷复合物 (Vanadyl-Ribonucleoside Complex, VRC);一、核酸分离、纯化原则;破碎组织细胞;临床常见的标本有血液、尿液、唾液、组织及体外培养的细胞等都可作为提取核酸的原料，具体实验材料的选择