果胶含量的测定方法二.docxVIP

果胶的测定（方案一）： 黄晓钰，刘邻渭等．食品化学综合实验 [M] ．中国农业大学出版社 . 2002． 158~159 实验原理 ：果胶经水解，其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应， 生成紫红色化合物， 其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比， 由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂 ： 1.化学纯无水乙醇或 95%乙醇。 2.精制乙醇：取无水乙醇或 95%乙醇 1000ml ，加入锌粉 4g，硫酸（ 1:1） 4ml ， 至于衡温水浴中回流 10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每 1000ml 加锌粉和氢 氧化钾各 4g，并进行蒸馏。 0.15%咔唑乙醇溶液：称取咔唑g，溶于精制乙醇并定容至 100ml 。 4.半乳糖醛酸标准溶液：先用水配置成浓度 1 g/L 的溶液，再配制成浓度分别为 0、10mg/L 、 20 mg/L 、30 mg/L 、40 mg/L 、50 mg/L 、60 mg/L 、70mg/L ）的系列半乳糖醛酸标准溶液。 5.优级纯浓硫酸。 操作方法 ： 1 样品处理： 总果胶提取 ：（鲜样）研磨新鲜样品 50g，放入 1000ml 烧杯中，加入 L HCl 400mL ，放置沸水浴中加热 1h，加热时应随时补充蒸发损失的水分。冷却后，移入 500ml 容量瓶，定容摇匀，过滤，滤液待用。（干样）磨细的干燥样品 5g，置于 250ml 三角烧瓶，加入 L HCL 150ml ，装上冷凝器，与沸水浴中加热 回流 1h，取出冷却甚至室温，用水定容至 200ml ，摇匀，过滤，滤液待用。 水溶性果胶提取： 新鲜样品应尽量研磨碎，干燥的样品应磨细后过 60 目筛。 样品中存在有果胶酶时，为了顿化酶的活性，可以加入适量热的 95%乙醇， 是样品溶液的乙醇最终浓度约为 70%，然后于沸水浴中沸腾回流 15min ，使果 胶酶钝化，冷却过滤后，以 95%乙醇洗涤多次，再用乙醚洗涤，以除去全部 糖类、脂类及色素，最后风干除去乙醚。 2 果胶提取：水溶性果胶的提取：将样品研碎，新鲜样品标准称取 30~50g，干 燥样品准确称取 5~10g 至于 250ml 烧杯，加入 150ml 水。加热至沸腾，并保持此状态 1h。加热过程随时填补蒸发损失的水分。取出冷却，将杯中物质移 入 250ml 容量瓶，用水洗涤烧杯，洗液并入容量瓶，最终定容至刻度，摇匀过滤，记录滤液体积。 3 标准曲线制作：取试管 8 支，各加入 12ml 浓硫酸，置冰水浴中冷却后，分别 将各种浓度的半乳糖醛酸 2ml 徐徐各加入试管中，充分混匀后，再置冰水浴 中冷却，然后置沸水浴中加热 10min ，迅速冷却至室温，各加入 1ml % 咔唑试 剂，摇匀，与室温下静置 30min ，用 0 好使观众的溶液调仪器零点，在530nm 波长下测定各管溶液的 A 530nm 值，以 A 为横坐标，半乳糖醛酸浓度为纵坐标 绘制标准曲线。 4 测定：取果胶提取液用水稀释至适量浓度（含半乳糖醛酸 10~70mg/L ）。移 取 12ml 冰水冷却的浓硫酸加入试管中，然后加入 2ml 样品稀释液，充分混 合后，至于冰水冷却。 取出后在沸水浴中加热 10min ，冷却至室温， 加入 1mL % 咔唑试剂，摇匀，于室温下静置 30min ，用空白试剂调零，在 530nm 波长下 测定 A 530nm 值，与标样对照，求出样品果胶含量。 计算： 可溶性果胶质含量（以半乳糖醛酸计） = 半乳糖醛酸（ mg/L ） 200 100 100% 样品质量（ g） 10 1000 说明 ： 1 糖分的存在对本法比色反应较大，使结果偏高，故样品中的糖分应预先出尽。 硫酸浓度对显色有影响，操作时必须保持硫酸浓度一致。 果胶的测定（方案二）： 一、 实验原理 本实验采用钙离子螯合剂和果胶酶提取水果中的总果胶物质，然后用分光光度法测定 总果胶物质，先用乙醇处理样品，使果胶沉淀，再用乙醇溶液洗涤沉淀，除去可溶性糖类、 脂肪、色素等物质，从残渣中提得果胶物质。采用 NaOH 溶液将果胶物质皂化，生成果胶 酸钠，再经乙酸酸化使之生成果胶酸，再加入果胶酶使之水解。 分光光度法测定是以果胶分子的基本结构单位——半乳糖醛酸和咔唑的反应为基础 的。果胶经水解生成半乳糖醛酸，在强酸中与咔唑发生缩合反应， 生成紫红色化合物， 其呈 色强度与半乳糖醛酸含量成正比，测定的结果可用脱水半乳糖醛酸（ AUA ）。 二、 实验仪器与试剂 仪器：玻璃器皿烧杯、试管、玻棒、胶头滴管、容量瓶、 PH 计、分光光度计 试剂：①果胶酶提取液： 1 份果胶酶试剂和 10 份水在一起搅拌 1h ，然后离心除去沉淀， 上清液即为果胶酶提取液；② 1%EDTA 溶液（乙二胺四乙酸） ；③醋酸溶液（ 1 份醋酸 +