核酸分子杂交技术核酸分子杂交的基本原理教学内容.pptVIP

核酸分子杂交技术核酸分子杂交的基本原理;核酸杂交; 一、DNA变性与复性;;2、变性的方法： （1）热变性：温度升高到90~100℃时，双链核酸 分子链间的氢键完全断裂。 （2）酸碱变性：pH值低于3或高于10时，双链核 酸分子链 间的氢键断裂。 （3）化学试剂变性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使 双链核酸分子链间的氢键断裂。 ;（二）复性 定义：变性的单链核酸分子在一定条件下按碱基互补原则重新结合为双链核酸的过程，称复性或杂交。 具有互补序列的两条单链核酸都可互补形成双链： DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA、寡核苷酸/DNA和寡核苷酸/RNA。; 二、影响杂交的因素 ; 4. 杂交液中的甲酰胺 甲酰胺能降低核酸杂交的Tm， 含30%—50%甲酰胺的杂交溶液温度能降低到30—42℃。 使用甲酰胺的优点：;5、核酸分子的复杂性： （1）核酸的复杂性是指存在于反应体系中不同顺序的总长度 （2）Cot?与反应体系中核酸复杂性成正比 （3）两个DNA样品浓度绝对一致时，变性后的相对杂交率取决于DNA的相对复杂性 ;6、非特异性杂交反应： （1）杂交前