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促进肿瘤细胞凋亡的新型抗癌药物研究 细胞凋亡是一个高度保守的对正常发育和组织稳态至关重要的过程。 成人体 内每天大约有五千万到七千万细胞经历细胞凋亡 , 无限制的细胞凋亡具有严重的 病理后果 , 因此体内细胞凋亡受到严格管控。 癌症是一种细胞因损伤或恶变而获得无限增殖能力的疾病 , 而逃避细胞凋亡 是癌细胞的重要特征之一。在过去三十年中 , 研究已阐明癌细胞中细胞凋亡抑制 的机制, 这为研究靶向细胞凋亡的疗法奠定了基础。 目前研究较成熟的细胞凋亡通路有两条 : 死亡受体介导的外源性凋亡通路和 线粒体介导的内源性凋亡通路。其中 ,Bcl-2 家族蛋白作为关键地细胞凋亡调节 因子之一 , 在线粒体凋亡通路中发挥重要作用。 研究发现, 肿瘤细胞通过过表达抗凋亡 Bcl-2 蛋白或低表达促凋亡 Bcl-2 蛋 白来逃避细胞凋亡 ,因此, 通过靶向抗凋亡 Bcl-2 蛋白（如抗凋亡 Bcl-2 蛋白抑制 剂）或重新激活促凋亡 Bcl-2 蛋白（ 如组蛋白去乙酰化酶抑制剂 ）可诱导细胞凋亡 进而杀死肿瘤细胞。新型抗凋亡 Bcl-2 蛋白抑制剂研究目前已报道的抗凋亡 Bcl-2 蛋白抑制剂大多为 BH3模拟物,即通过模拟 BH3-only 蛋白的 BH3结构域与 抗凋亡 Bcl-2 蛋白的疏水性结合腔间特异性结合 , 干扰抗凋亡和促凋亡 Bcl-2 蛋 白之间的蛋白 - 蛋白相互作用。 酪氨酸衍生物 41 是本课题组过去研究制备的一个化学合成中间体 , 近期发 现该化合物对 Bcl-2 蛋白具有一定的亲和力 （Ki=8.4 μM）, 适合作为先导化合物 进行深入结构改造。 分子对接结果显示 ,41 占据 Bcl-2 蛋白 BH3疏水结合腔的 p3 和 p4 口袋, 而结构中苯磺酰胺部分的苯环朝向 p2 口袋, 但并未与之结合。 结合分子对接结果以及文献报道的 Bcl-2 蛋白抑制剂的构效关系 , 我们保留 了先导化合物 41 的酪氨酸骨架和苯磺酰胺部分 , 在苯磺酰胺部分的苯环上引入 取代基(硝基和 R2),以期增加化合物与 p2 口袋的结合 ,提高化合物与 Bcl-2 蛋白 的亲和力。其次 , 我们根据药物化学的生物电子等排原理和同系原理将先导化合 物 41 结构中的联苯基团替换为取代苯基 (R1) 、Boc 替换为各种酰基 (R3), 考察这 两部分对化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力的影响。 通过上述对先导化合物 41 的结构改造我们设计合成了一系列酪氨酸衍生物 (series A)。此外, 我们应用构象限制性原理 , 将酪氨酸骨架进行芳香氨基酸侧链 环化, 以实现对先导化合物的骨架跃迁 , 设计合成了一系列四氢异喹啉类衍生物 (series B) 。 与series A设计思路类似 , 我们在苯磺酰胺部分的苯环上引入取代基 (硝基、 R3), 以期增加化合物与 p2 口袋的结合 ,增强化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力 ; 根据 药物化学生物电子等排原理和同系原理将先导化合物 41 结构中的联苯基团替换 为烷基和取代苯基 (R1) 、Boc替换为各种烷基 (R2), 考察这两部分对化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力的影响。对合成的 seriesA 和 seriesB 系列目标化合物 , 我 们首先采用荧光偏振法测定其对 Bcl-2 蛋白的亲和力 , 然后选取代表化合物测定 其对 Bcl-XL 和 Mcl-1 蛋白的亲和力 , 探讨目标化合物对 Bcl-2 家族蛋白的选择性 同时采用 MTT法测定代表化合物抗细胞增殖能力 ;根据上述实验结果 , 选取化合 物测定其诱导细胞凋亡及 caspase-3 活化的能力。 测试结果显示 , 部分目标化合物对 Bcl-2 蛋白的亲和力明显提升 ,14 个 series A 化合物和 14 个 series B 化合物的活性优于先导化合物 41, 其中 A3、 A24、A28、B25和 B26等目标化合物的活性优于阳性对照棉酚。对 series A 化 合物而言 ,Boc 基团对目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力有很大影响 去除 Boc基团后,相应目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力丧失 ,如 A14-A19; 而当 Boc被类似的酰基替换后 , 相应目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力保持或提 高,如 A20-A28。总体而言,苯磺酰胺苯环上取代基取代有利于相应目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力 ,如 A3、A24和 A28等;但是对位环烷基氨基类取代基除外 , 该类取代基将导致相应目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力丧失 ,如A8、A9和 A27。 相对而言, 联苯部分的变化对相应目标化合物与 Bcl-2 蛋白的亲和力影响不 大,如A1 vs A3 vs A5 、A6 vs A7