精选幻灯片试验3重组质粒DNA提取及双酶切鉴定.pptVIP

1. 质粒 DNA 提取 2. 限制性内切酶切割重组质粒 实验三 1 实验目的 ? 掌握质粒提纯的原理和方法 ; ? 掌握核酸内切酶切割质粒的原理并学 会运用内切酶 . 2 ? 预习：基因克隆示意图 载 体 DNA ( 限制性内切酶切开 ) 目的基因 ＋ 宿主细胞 ＋ 重组体 已转化的宿主细胞 阳性克隆株 繁殖 表达 3 基因克隆 操作过程： 分 分离载体 和目的基因 切 限制 酶切载体 与目的基因 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 4 基因载体（ gene vector ） ＊ 什么是基因载体 把一个有用的目的 DNA 片段通过重组 DNA 技术， 送进受体细胞中去进行复制和表达的工具 ＊ 基因载体的作用 ※为目的基因提供进入受体细胞的转移能力 ※为目的基因提供在受体细胞中的复制（或整 合）和表达 所需条件 5 基因载体应具备特点 1. 具有 独立 复制能力 ，在细胞中能大量繁殖，从而使目的基因 大量扩增 2. 作为表达载体应能利用宿主的酶系统， 表达目的基因 （表达 能力） 3. 具有适当的限制性内切 酶识别和切割位点（ 酶切位点） 4. 细胞内稳定性高（ 持续表达和复制） 5. 具有供筛选用的（ 遗传标记） 6. 相对分子量小（ 一定的容量） 6 6 基因载体类型 ? 质粒 (plasmid) ? 粘粒（ cosmid ） ? 噬菌体 (ph