实时荧光定量PCR详细操作步骤.pdfVIP

. 实时荧光定量 PCR 组织 RNA 提取： 一般认为 100mg肝组织提取 RNA 500ng，100mg肺提取 RNA 200ng，脑内的 RNA 丰度适中， 100mg脑组织，提取 RNA 5-200ng。所以一个 10mg的海马可匀 出RNA 约为20ng。 反转录反应 反转录反应参照 TaKaRa RT-PCR说明书。 反转录反应条件如下。 37°C 15 min （反转录反应） 85°C 5 sec （反转录酶的失活反应） Real Time PCR 反应 选用脑源神经营养因子（ BDNF ）为目标基因，核糖体 18S rRNA(18S rRNA) 做为内参。 基因 引物序列 扩增片段长度 NR2B NR2B(+) CCGCAGCACT