土壤蔗糖酶活性测定方法.docxVIP

土壤蔗糖酶活性测定 原理 采用 3,5-二硝基水杨酸比色法。 该方法以蔗糖为基质， 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡 萄糖，葡萄糖和 3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的 3-氨基 -5-硝基水杨酸，并在 508nm 波 长下有最大吸光值。 测定方法 称取壤土 0.15g、砂土 0.3g、粘土 0.1g风干土于10mL离心管中，加入 0.06 mL甲苯 和1mL ph5.5磷酸缓冲液，再加 3mL 8%蔗糖溶液，摇匀后加盖，放进 36~37C的培养箱中 进行培养 24 个小时； 培养完成后取出，摇匀，并于 4000r/min离心5min ； 取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中，并加入 0.5ml3,5-二硝基水杨酸，再立即将玻璃 管沸水浴中加热5min，加热完毕后在自来水流下冷却 3min ; 将显色液体用蒸馏水稀释到 5ml，在508nm波长下比色，记录吸光值。 蔗糖酶标准曲线的测定方法 （1 ）葡萄糖标准溶液的配制 a. 饱和苯甲酸溶液的配制 在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水， 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌， 直至苯甲酸溶 解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。 b. 标准葡萄糖溶液的配制 称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中， 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定 容（ 5mg/ml）。 （2） . 操作步骤 取 11 支洁净 20ml 玻璃管编号 0—10。 按下