新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程.pdfVIP

新城疫油苗和冻干苗疫苗的生 产工艺流程 新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当 -4 -5 稀释 (如 10 或 10 ),尿囊腔内接种 10 日龄 SPF 鸡胚 ,每胚 0.1ml 。选接种后 72~120 小时死亡、 且病痕明显的鸡胚 ,分别收获鸡胚液 (尿囊液及羊 水),装于灭菌容器内。将检验无菌、且对 1%鸡 红细胞凝集价 ≥1:640(微量法 1:512)的鸡胚液混 合 ,定量分装于安瓿中 ,冷冻保存。注明收获日期 , 毒种代数等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理 -7 -8 -9 盐水作为 10 倍系列稀释，取 10 、10 、10 3 个稀释度各尿囊腔内接种 10 日 SPF 鸡胚 5 个， 每胚 0.1ml ，置 36~37℃继续孵育， 48 小时以前 死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120 小时死亡的鸡 胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合， 按稀释度分别测定红细胞凝集 价，至 120 小时，取出所有活胚 ,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价 ≥1:160 (微量法 1:128)者判为感染，计算 EID 50 ，每 0.1ml 8 病毒含量应 ≥10 50 EID 。 1.2.2 纯净 应无细菌、 霉菌、支原体和外源病 毒污染， 分别按 《无菌检验或纯粹检验标准操作 规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒 检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存 ,应不超过 1 年。 1.4 毒种继代 应不超过 3 代。 2 制苗材料选择 选择发育良好的 9~11 日龄 SPF 鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备 3.1 接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当 稀释 (如 10-4 或 10-5),每胚尿囊腔内接种 0.1ml ， 接种后密封针孔，置 36~37℃继续孵育，不必翻 蛋。 3.2 孵育和观察 鸡胚接种后 ,每日照蛋一次， 将在 60 小时前死亡的鸡胚弃去。 60 小时后 ,每 4~8 小时照蛋一次 ,死亡的鸡胚随时取出 ,直至 96 或 120 小时 ,不论死亡与否 ,全部取出 ,气室向上直 立 ,置于 2~8℃冷却。 3.3 收获 将冷却 4~24 小时的鸡胚取出 ,用碘 酊消毒气室部位 ,然后以无菌手