荧光探针设计原理.docxVIP

荧光化学传感器是建立在光谱化学和化学波导与量测技术基础 上的将分析对象的化学信息以荧光信号表达的传感装置。 其主要组成部件有三个 (图 1．1)：1．识别结合基团 (R)，能选择性地与被分析物结合，并使传感器所处的化学环境发生改变。 这种结合可以通过配位键，氢键等作用实现。 2．信号报告基团 (发色团 , F)，把识别基团与被分析物结合引起的化学环境变化转变为容易观察到的输出信号。 信号报告基团起到了信息传输的作用， 它把分子水平上发生的化学信息转换成能够为人感知 (颜色变化 )或仪器检测的信号 (荧光等 )。3．连接基团 (S)，将信号报告基团和识别结合基团连接起来，根据设计的不同连接基团可有多种选择，一般用做连接基团的是亚甲基等短链烷 基。连接基团的合适与否将直接影响是否有输出信号的产生。 信号表达可以是荧光的增强或减弱、光谱的移动、荧光寿命的变化等。 图 1.1 荧光探针的结构 1.1.1 荧光探针的一般设计原理 结合型荧光探针 [21] + Signalling Space Binding Analyte Output subunit subunit signal 图 1.2 共价连接型荧光探针 结合型荧光探针是利用化学共价键将识别基团和荧光基团连接 起来的一类荧光探针， 是比较常见的一类荧光探针。 该类探针通过对比加入分析物前后荧光强度的变化、 光谱位置的移动或荧光寿命的改变等实现对分析物的检测。 在该类荧光化学传感器的设计中， 必须充分考虑下列三个方面的因素。 (a) 受体分子的荧光基团设计、合成：考虑到用于复杂环境体系的荧光检测，要求荧光基团要有强的荧光 （高荧光量子产率，有利于提高检测的灵敏性） ，Stokes 位移要大（可有效消除常规荧光化合物如荧光素等具有的自猝灭现象） ，荧光发射最好要在长波长区（最好位于 500 nm 以上，可避免复杂体系的常位于短波长区的背景荧光的干扰， 另外由于长波长区发射的荧光能量的降低可减少荧光漂白现象的发生而延长传感器的使用寿命） 。(b) 受体分子的识别基团： 受体分子的识别基团设计以软硬酸碱理论、 配位作用以及超分子作用力（如氢键、范德华力等）作为理论指导，多选择含氮、硫、磷杂环化合物作为识别分子。 (c) 荧光超分子受体的组 装：组装荧光超分子受体就是利用一个连接基将识别基团和荧光基团 通过共价键连接在一起， 要充分考虑到识别基团和荧光基团之间能通 过连接基进行信号传递， 对识别对象的识别信息（如荧光的增强或减弱、光谱的移动、荧 光寿命的变化等）可以及时传递出去。 N N N 1 图 1.3 共价连接型锌离子荧光探针 De Silva 在 1997 年报道的化合物 1 [22] 是一个典型的共价连接 法设计的荧光探针。 它分别以有优良光学性质的蒽作为荧光基团， 以 Zn2+有特异性识别的基团双 ( 2- 吡啶甲基 ) 氨 (DPA) 为识别基团，通过亚甲基将识别基团和荧光报告基团连接在一起。 通过对比加锌前后荧光强度的不同实现了对锌离子的检测。 置换型荧光探针 图 1.4 置换型荧光探针 利用该方法设计的荧光探针是通过识别基团分别与荧光指示剂 和被分析物结合能力的强弱来实现对被分析物的检测。 该类传感器对识别基团和荧光指示剂的要求都比较高， 既要选择能和识别基团结合但结合能力又不是特别强的荧光指示剂， 又要设计对被分析物能特异识别的识别基团。该类设计方法多用于阴离子传感器的设计。 2002 年，Kim 小组 [23] 设计了邻苯二酚紫作为荧光指示剂， 双锌配 合物为 2- 识别基团，并将二者自组装成化合物 2，用于中性条 HPO 4 件下水溶液中 2- 的检测。加入识别客体 2- 2- 与 HPO HPO 后，由于 HPO 4 4 4 双锌配位能力强于邻苯二酚紫，从而把邻苯二酚紫挤开，使之进入 溶液，表现为其原来颜色。在识别过程中，溶液颜色从蓝色变为黄 - 2- - - - 2- - - - 都不影响 色，常见的 Ac 、CO3 、NO3 、N3 、ClO4 、S 、F 、Cl 、Br 2- HPO4 的检测，表现出较好的选择性。 2- 图 1.5 置换型 HPO4 化学传感器 (3) 化学计量型荧光探针（ chemodosimeter） 化学计量型荧光探针分子是利用探针分子与识别客体之间特异 不可逆的化学反应前后产生荧光信号的不同而对分析对象进行检测 [24] 的一类探针 。主要包括两种类型： 一类是目标离子和探针分子发生 化学反应后仍旧通过共价键相连接 : 另一类是目标离子催化了一个化 图 1.6 化学计量法的两种类型 一般而言，化学计量型荧光探针分子都具有专一性和不可逆性。 尽管这类探针已有不少报道 , 但由于设计较为困难和反应不够灵敏等 缺陷而进展