7300荧光定量PCR仪标准操作规程.docVIP

一、仪器操作 1、开计算机 开主机电源 双击ABI Prism 7300 SDS?软件。 2、在?New Document Wizard?窗口中选择?Assay?等 3、设定完成后按下?Next?，选择?Detector?按下?Add?将Detector?加入?Plate Document?按下Next。 如要设定新?Detector?则按下New Detector?选择新Detector。 4、选定?Plate Document?中放样品的?Wells后 选定适当的Detector，击Detector?列中的?Use?框 从Task?栏中选择种类：Unknown、?NTC?或?Standard。 5、?输入样品名称可从?View?列中选择?Well Inspector。 同名称者，软件即视为重复样品，会自动计算平均值及标准偏差。 6、?若此?Plate Document?常用，可将其存成?Template。从File menu?下选?Save As，输入文件名并存成?SDS Templates (*.sdt)?格式。 7、?若不存成?Template，则先存下此?Plate Document?从File?下选?Save As，并将档案种类存成?SDS Document (*.sds)?格式。 8、?检查?PCR?条件，将样品盘放入机器中，并准备收集?data。 在?Plate Document?上击Instrument，进入?PCR?设定窗口。 若要更改温度及时间，可击?Add Cycle, Add Hold?或?Add Step； 若为?SYBR?的反应，则击Add Dissociation； 收集讯号可在?Results?下击?Amplification Plot，收集过程中可同步观察?Amplification Plot。 9、再存一次后，按下?Start?即开始进行?PCR?及讯号之收集。 10、 结果分析：收集data，检视?Amplification Plot?或其它?data。 若?data?已分析完成，在?Amplification Plot?中?Threshold?为綠色线；红色线表示未分析。 输出或列印结果：若?data?有问题时，可检视?Spectra?或Component data，设定?baseline?及threshold，重新分析。 ? 二、注意事项: 1.?在?ABI 7300?上可使用?96 well plate?或单一的?PCR tube，当使用单管的?tube?时可直接上机或配合?tray/retainer?一起使用。 2.?管子及盖子上请勿标记任何记号，以免墨色脱落，沾到?PCR block 上增加背景值。 3.?定期以棉花棒沾超纯水清洁?PCR block?以增加侦测灵敏度。 4.?为确保机器侦测的灵敏度，每月重新?run?一次?background plate