质谱联用仪组成及原理高效液相色谱一质谱联用仪hplc／ms讲课讲稿.ppt

质谱联用仪组成及原理高效液相色谱一质谱联用仪HPLC／MS; 1、概述; 与气相色谱质谱联用技术( Gas Mass Spectrometry)相比，气相色谱质谱联用技术发展较早，技术较为成熟，但GC样品要求有一定的蒸汽压，实际应用中只有少部分样品可以不经过预先处理可达到GC的分离要求，多数情况下需要做预处理或衍生化使之成为易气化的样品才能进行GC-MS分析；而液相色谱不受上述限制，可分离高极性的和热不稳定的化合物，这使得液相色谱质谱联用技术具有更广阔的应用前景 。 ;2、液相色谱-质谱联用技术的特点; 高效液相色谱是以液体溶剂作为流动相的色谱技术，一般在室温下操作，可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物和大分子化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等），分析范围广，而且不需衍生化步骤。 质谱是化合物(或单质)固有特性之一，不同的化合物除一些异构体外，均有不同的质谱，利用这一性质可进行定性分析。;对于色谱工作者来说，质谱仪的使用可以： ;对于质谱工作者来说，与液相色谱联用可以： ;3、液相色谱-质谱联用仪组成及原理 ;3.1 进样系统 ;3.2 离子源 ;3.2.1 离子源的分类及特点 ; API 技术是当今质谱界最为活跃的领域，它是一种常压电离技术，不需要真空，减少了许多设备，使用方便，因而近年来得到了迅速的发展。 API 主要包括电喷雾离子化( ESI)，气动辅助电喷雾即离子喷雾离子化( ISI) 和大气压化学离子化(APCI) 3 种模式。它们的共同点是样品的离子化在处于大气压下的离子化室内完成，离子化效率高，大大增强了分析的灵敏度和稳定性。 ;（1）电喷雾离子化(ESl)工作原理 ; ESI的适用范围：中等极性或极性有机分子，配合物，蛋白质，多肽，糖蛋白，核酸及其他多聚物。 ;（2）离子喷雾离子化( ISI)工作原理 ;（3）大气压化学电离(APCI)工作原理 ; APCI主要应用于低极性或中等极性小分子分析，要求待测化合物易挥发且有一定的热稳定性。由于极少形成多电荷离子，分析的分子量范围受到质量分析器质量范围的限制。 ;3.3 质量分析器 ;3.3.1 四极杆质量分析器 ; 当离子束进入筒形电极所包围的空间后???离子作横向摆动，在一定的直流电压、交流电压和频率，以及一定的尺寸等条件下，只有某一种（或一定范围）质荷比的离子能够到达收集器并发出信号（这些离子称共振离子），其他离子在运动的过程中撞击在筒形电极上而被“过滤”掉，最后被真空泵抽走（称为非共振离子）。; 如果使交流电压的频率不变而连续地改变直流和交流电压的大小（但要保持它们的比例不变）（电压扫描），或保持电压不变而连续地改变交流电压的频率（频率扫描），就可使不同质荷比的离子依次到达收集器（检测器）而得到质谱图。;3.3.2 离子阱质量分析器; 离子阱由一个双曲线表面的中心环形电极和上下两个端电极间形成一个室腔（阱）。直流电压和高频电压加在环形电极和端盖电极之间，两端电极都处于地电位，在适当条件（环形电极半径、两端电极的距离、直流电压、高频电压）下，由离子源（EI或CI）注入的特定m/z的离子在阱内稳定区，其轨道振幅保持一定大小，并可长时间留在阱内，反之不稳定态离子（未满足特定条件者）振幅很快增长，撞击到电极而消失，质量扫描方式和四极滤质器相似，即在恒定的直流交流比下扫描高频电压以得到质谱图。 ;3.3.3 飞行时间质谱仪; 飞行时间质谱仪特点为： （1）质量分析器既不需要磁场，又不需要电场，只需要直线飘移空间。因此，仪器的机械结构较简单。 （2）扫描速度快，可在10-5～10-6s时间内观察、记录整段质谱，使此类分析器可用于研究快速反应。 （3）不存在聚焦狭缝，因此灵敏度很高。 （4）测定的质量范围仅决定于飞行时间，可达到几十万u。;3.3.4 傅立叶变换质谱仪;3.3.5 质量分析器的主要技术参数; （1） 理论分辨率规定为两个质量为M1和M2的相邻质谱峰刚好分开时仪器的分辨本领，用R表示，即两峰质量的平均值与它们的质量差的比值。 ;（2）灵敏度是表示质谱峰强度与所需样品量之间关系的量度。 目前有机质谱的灵敏度的测试一般用某一浓度的利血平(Reserpine)，绝对进样量为pg级时所产生质谱信号的信噪比(S／N，即峰高与基线宽度之比)表示。 一般来说，有机质谱仪的分辨率和灵敏度是相互制约的。 ; （3）有机质谱仪的质量范围是指仪器能够准确测定离子的最大质量数。最大质量数的获得与加速电压有直接的联系。加速电压