Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒Bradford Protein Assay Kit.pdf

Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit 品编号：C503031 包装规格：200 Assays/ 1000 Assays+10 Microplates 品简介 Bradford试剂蛋白定量是一种快速，即用型的总量蛋白光学定量方法，在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏 水区结合，导致最大吸收峰由465 nm变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的 高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA与Bradford 剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA 建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。 h 品特点 c 1. 检测速度快，10~20个样品只需不足10 min 即可完成。 e 2. 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2 g，待测样品体积1~20 L。 t 3. 在10~150 g/mL浓度范围内有较好的线性关系。 4. 与还原性糖和还原性巯基试剂兼容。 o i 运输和保存条件 常温下运输，收到后，将Bradford 试剂和PBS在2~8°C环境中保存，5 mg/ml 蛋白质标准液-20°C保存，保质期两年。 B 试剂盒组成 n 组分 C503031 Bradford试剂 o 200 mL BSA标准蛋白 5 mg/mL 1 mL 1×PBS g 10 mL 操作步骤 n A试剂准备 a 1. 取一定量的BSA蛋白质标准液(5 mg/ml ) ，用1X PBS稀释为终浓度为200 g/ml。 2. 将样品用1X PBS做适当倍数的稀释。 3. 取8支1.5mL离心管，按照下表的比例分别加入各溶液，其中0号管为空白对照。 S 溶液管号 0 1 2 3 4 5 6 7 1X PBS ( L) 300 285 270 240 210 180 150 75 0.2 mg/mL BSA ( L) 0 15 30 60 90 120 150 225 BSA浓度( g/mL) 0 10 20 40 60 80 100 150 B. 分光光度法 1. 取20支1.5 mL离心管，分为标准组和样品组。其中16支1.5 mL离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入100 L 相应浓度的标准蛋白质溶液(200 g/mL)；剩余4支1.5 mL离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。其中编号 不同的两管加入100 L浓度不同的样品稀释液。 2. 各管加入1 mL Bradford工作液，迅速混匀。 3. 室温25~30°C，反应5 min后，以0号管为空白对照，在分光光度计上测各管的A595值。 4. 以标准组各管A595平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel 件中绘制标准曲线。 5. 根据两个相同样品稀释液A595值的平均值，在标准曲线上计算出该样品经过稀释后的蛋白质浓度。选择合适稀释度的 样品计算最终的样品蛋白浓度，再由稀释倍数计算原样品蛋白质浓度 C. 酶标板法 1. 选取酶标板上20个孔（容积250