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HPLC应用与操作技术
中明善大学。。
HPLC方法建立的步骤
样品的性质和分离目的
样品前处理方法的选择
检测器的选择
选择、优化色谱分离条件
纯化物质十[定量分析匚定性分析
[方法学确证
中明等种大学
PLc条件的选择
一般样品:等度洗脱、梯度洗脱、离子抑制、离
子对、正相、衍生化
无机离子:检测成问题,离子色谱、电导检测器
对映异构体:手性高效液相色谱
生物大分子:色谱柱孔径较大(大于10nm)
中明等种大学
《 Practical HPLC Method Development》
L R Snyder, J. Kirkland
《实用高效液相色谱方法建立》
下载网址
cn/bbs/shtml/200804
26/1236422/
中明等种大学
药物衍生化的目的
减小前处理难度或增加稳定性;
改善色谱分离
提高检测性能;
中明等种大学
衍生化方式
特点限制
柱前衍生化改善色谱分
复杂样品衍生
化难度大。
有利于复杂样不改善色谱分
柱后衍生化品的生化分离,反而可能
析
造成峰展宽。
中明等种大学
荧光衍生化反应
H2C、CH
取代基
荧光团
SO2NHNH
反应基团
衍生化试剂的基本结构示意图
中种大
胺类和氨基酸的荧光衍生化试剂
含有羰基的试剂
CHO
S-R
RNH
CHO
RSH
邻苯二甲醛(OPA)
激发波长:340nm发射波长:455mm
特点:本身无荧光,产物有荧光;反应迅
速,适合柱后衍生化。
中明等种大学
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