免疫学检验 沉淀反应 15 第十四章 沉淀反应.pptVIP

小结 Sum up 沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。 根据反应介质和检测方法的不同，沉淀反应可分为液相内沉淀试验、凝胶内沉淀试验和凝胶免疫电泳技术。 感谢观看！ Thank！ 第十四章 沉淀反应 本章要点 沉淀反应的概念及特点。 1 液相内沉淀试验的原理及种类。 2 凝胶内沉淀试验的原理及种类。 3 双向琼脂扩散试验的应用。 4 凝胶免疫电泳技术的种类及原理。 5 沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。 6 CONTENTS 目 录 01 02 03 液相内沉淀试验 凝胶内沉淀试验 凝胶免疫电泳技术 前 言 沉淀反应（precipitation ) 可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下而出现的沉淀现象。 多克隆抗体可与抗原表面多个不同的表位结合，容易与多个抗原交联成网状结构而发生沉淀，而单克隆抗体只与抗原表面的一种表位结合，不易形成交联，故不适用于免疫沉淀试验。 沉淀反应分类 1.液相内沉淀试验 环状沉淀反应、絮状沉淀反应、 免疫比浊度分析。 2.凝胶内沉淀试验 单向琼脂扩散试验、双向琼脂 扩散试验。 3.凝胶免疫电泳技术 对流电泳技术、免疫电泳技术、 火箭电泳技术、免疫固定电泳技术。 液相内沉淀试验 01 液相内沉淀试验 环状沉淀试验： 抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。 1 液相内沉淀试验 絮状沉淀试验： 可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。 2 液相内沉淀试验 环状沉淀试验： 透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。 3 凝胶内沉淀实验 02 凝胶内沉淀实验 指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。 凝胶内沉淀实验 一、单向琼脂扩散试验 （平板法） 一、单向琼脂扩散试验 （平板法） 抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。 本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。 一、单向琼脂扩散试验 （平板法） 单向免疫扩散试验 凝胶内沉淀实验 二、双向琼脂扩散试验 （平板法） 二、双向琼脂扩散试验 （平板法） 将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含量估计、相对分子量分析和性质分析。 本法操作简单、特异性高、结果可靠、成本低廉，但灵敏度低，耗时长，不能精确定量。 二、双向琼脂扩散试验 （平板法） 双向琼脂扩散试验应用 双向琼脂扩散试验应用 A：Ag、Ab浓度及分子量近似；B ：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＜ Ab； C：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＞ Ab ； D：浓度Ag ＞ Ab，分子量近似； E：浓度Ag ＞ Ab，分子量Ag＜ Ab；F：浓度Ag ＜ Ab，分子量Ag＞ Ab 1.抗原或抗体的定性分析。 2.抗原、抗体的相对分子量和相对浓度的估计。 双向琼脂扩散试验应用 抗原完全相同 3.抗原性质的分析 抗原部分相同 抗原完全不同 双向琼脂扩散试验应用 4.抗体效价的测定 5.抗原或抗体纯度的鉴定 凝胶免疫 电泳技术 03 凝胶免疫电泳技术 电泳分析与沉淀反应的结合产物，即可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。该技术提高了沉淀反应的速度和敏感度，广泛用于临床实验诊断和科学研究。 凝胶免疫电泳技术 一、对流免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 无沉淀线出现表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。 一、对流免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 一、对流免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 二、火箭免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 单向免疫扩散和电泳的定量检测技术。固定抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量减少，基底区越来越窄，形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个如火箭的沉淀峰，峰的高度与抗原量呈正相关。 二、火箭免疫电泳技术 　　　　火箭免疫电泳图 ①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本 - + 凝胶免疫电泳技术 三、免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 三、免疫电泳技术 凝胶免疫电泳技术 四、免疫固定电泳技术 凝胶免疫电泳技术