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【代码M0201】PCR引物设计方法 2016-03-23实验管家 实验管家 引物设计的软件有很多，PRIMER3,Primer Premier 5.0,PRIMER EXPRESS等都可以。下面以Primer3为例做介绍（还看不明白的，师弟找师姐，师妹找师兄问哈） 首先，要先对PCR目的序列的长度有个大致估计： 第一步：找到Primer3的站点。网址是http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/。（也可以访问新版网站：http://primer3.ut.ee/） 第二步：贴上模板序列。进入Primer3站点，可以看到一个引物设计的界面。（附件Word文档里有图）在“Paste source sequence below (5-3…..”下面的大空框里面把你的模板序列粘帖进去。注意是5-3方向的，数字或者空格都没关系，软件会自动过滤的 第三步：重要参数设定。”，默认值一般可以用，但是，当你用熟了这个软件，你自己就知道该怎么改了。 第四步：Pick primers：点一下这个按钮，符合你大小预期的primer就出来了，看看Primer3 Output的界面，多么漂亮！你要的primer出来了，而且有primer在序列上的位置比对图，还要primer本身的信息，包括位置，长度，Tm，GC含量，任何位置互补碱基数，3端互补碱基数，以及引物序列，（注意，下游引