【代码M0906】文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母.docxVIP

【代码M0906】文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母 2015-10-14实验管家 实验管家 一.?试剂： 1.?培养基： 2.?其它贮备液： 50% PEG 4000 (Sigma?公司，wt.=3,350)，用前抽滤或高压蒸汽灭菌； 100% DMSO (Sigma?公司)； 10?×?TE: 0.1 M Tris-HCl(pH7.5)，10mM EDTA，高压蒸汽灭菌； 10?×?LiAc: 1M LiAc?用乙酸调?pH7.5，高压蒸汽灭菌； 10?×?Dropout/ -Trp-Leu?溶液: 3.2g DOSupplement (-Leu-Trp)?溶于?500ml ddH2O?中； 20?×?Leu: 200 mgL-Leucine?溶于?100ml ddH2O?中； 0.2%Adenine: 0.2g Adenine HemisulfateSalt(Sigma?公司)溶于?100ml ddH2O?中； ddH2O:?高压蒸汽灭菌; 二.?实验步骤： 1.?从?SD/-Trp?平板上挑取直径?2-3mm、携带?pGBKT7-bait?质粒（小规模转化）的?AH109单克隆，接入?1 ml SD/-Trp?液体培养基中，振荡打散菌落，然后接入?50 ml SD/-Trp液体培养基中，30°C?恒温，250rpm振荡培养过夜（16-18hr），至?OD6001.5