IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体.docx

附件1 IgM捕捉ELISA法(MacELISA 检测出血热IgM抗体 本试剂盒系采用抗人 卩链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶-病毒 抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重 复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为 96 人份/ 包装。 试验材料： 抗人IgM抗体(卩链)：用pH9.5的包被液包被酶标板 冻干阳性血清 /冻干阴性血清 1 支， 0.2ml/ 支，工作浓度为 1： 10； 冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物 1 支， 0.5ml/ 支，工作浓度为 1 ： 20 ； ( 4)冻干小牛血清 1 支， 1ml/ 支； (5)浓缩洗液(10倍浓缩)1瓶，50ml;(标本稀释液为含5%」、牛血清原 倍洗液)； ( 6)A/B 显色液和终止液各 1 瓶。 (冻干试剂先用相应量的去离子水溶解， 然后临用前根据所需按工作浓度稀 释使用，余下的放-20 C保存) ( 7)终止液： 4N H2SO4 ( 8)酶标仪。 检测步骤： 将待检血清用稀释液100倍稀释，加入已包被抗人 卩链抗体的酶标板 一孔中，100卩1/孑L,同时加入已1: 10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔， 100卩1/孑L,置37C水浴孵育1小时。 弃去血清，用PBS- T漂洗5遍，甩干。 将冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物 1： 10稀释后，加入反应板 相应孔内，100卩l/孑L, 37r水浴孵育1小时。 弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤 6 次，甩干。 加显色液：于各反应孔内加A/B液各一滴，37T，避光3?5分钟。 加终止液(4NH2SO4于每反应孔，一滴/孔。 结果判断： （1）目测方法： 阳性对照孔呈明显蓝色， 阴性对照孔呈无色， 对照成立； 若待检血清孔呈明 显淡蓝色或深蓝色（TMB,则标本为出血热IgM抗体阳性，反之阴性。 （ 2 ）酶联免疫检测仪检测： 于450nm（ TMB阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N>2.1，对照成 立；若待检血清孔ODfi与阴性对照孔OD比值》2.1，则标本为流行性出血热IgM 抗体阳性，反之阴性。 （阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算） 意义： 阳性结果，表明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。