复习课件分子遗传学课件-遗传多态性.ppt

限制性片段长度多态性的DNA基础 （1） 识别部位的点突变：碱基的替换、修 饰（甲基化）或插入与缺失。 （2） 识别部位间的片段插入与缺失。 （3）?识别部位间的重复序列数目的变化。 最新.课件 *2 DNA限制性内切酶 restriction endonuclease 能够识别特定的DNA序列，与DNA分子结合后在特定部位将DNA双链切断的核酸水解酶。 （1）生物学功能：水解核酸的磷酸二酯键。 （2）命名：根据微生物的种（第一个字母大 写）、属（前二个字母小写）、变种第一个 字母大写）、发现分离的顺序（罗马数字）。 （3）分类： A：Ⅰ型：远离识别部位随即切割，非特异。 B：Ⅱ型：在识别部位内部切割，特异。 C：Ⅲ型：在识别部位后定点切割，特异。 单位：1U：在标准条件下，1h完全水解1μgλ噬菌体的酶量。 最新.课件 *2 Ⅱ型DNA限制性内切酶： A：识别核酸序列数目4-6个。 B：识别序列为回纹序列。 C：切割后产生的末端分为粘行末端与平 末端。 例：PstⅠ 5ˊ-C↓TGCAG-3ˊ 3ˊ-GACGT↑C-5ˊ HaeⅢ 5ˊ-GG↓CC-3ˊ 3ˊ-CC↑GG-5ˊ 最新.课件 *2 最新.课件 *2 分型法： RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。 RFLP技术主要包括以下基本步骤： DNA提取　　　用限制性内切酶酶切DNA 、 　　　用凝胶电泳分开DNA片段　　　把DNA片段转移到滤膜上　　利用放射性标记的探针杂交显示特定的DNA片段（Southern杂交）和结果分析。 最新.课件 *2 最新.课件 *2 最新.课件 *2 特点 A 无表型效应，RFLP标记的检测不受环境条件和发育阶段的影响。 B RFLP标记在等位基因之间是共显性的，因此在配制杂交组合时不受杂交方式的影响。 C 在非等位的RFLP标记之间不存在上位效应，因而互不干扰 D RFLP标记起源于基因组DNA的自身变异，在数量上几乎不受限制 E DNA需要量大，检测技术繁杂，难以用于大规模的育种实践中。在植物分子标记辅助育种中需要将RFLP转换成以PCR为基础的标记。 最新.课件 *2 PCR-RFLP 最新.课件 *2 PCR-RFLP Analysis TT: 55+68+135+241+302bp CT: 55+68+135+241+302+543bp CC: 55+68+135+543bp AA: 152+187+462bp CA: 83+104+152+187+462bp CC: 83+104+152+462bp 最新.课件 *2 微卫星标记技术 真核生物基因组中广泛存在着串联重复序列。根据重复单位大小的不同，将重复序列分为三 类：卫星序列、小卫星序列和微卫星序列。 卫星DNA: 序列重复单位的长度最常见的是100~300bp,有时可达几千bp,这些基元的拷贝数是1000~100000,形成很长的成串的重复结构.通常存在于异染色质，主要分布在着丝粒区域。 小卫星DNA:是一些重复单位在10~60bp,总长度由几百到几千个bp串联重复序列,它主要存在于近端粒处,在不同的个体间存在着串联数目的差异,表现出高度的个体特异性,且以孟德尔方式稳定地遗传和分离,通常又被称为DNA指纹.该类可通过RFLP的方法加以鉴别. 最新.课件 *2 简单序列重复标记，SSR 又称微卫星DNA(Micro-satellite DNA)标记； 属高度重复序列，重复单元2~6bp，如(CA)n、(AT)、(GGC)n等重复，重复区大多几十~几百bp，分散在基因组中，大多不存在于编码序列内，具有较高的多态性。呈现孟德尔式遗传。目前微卫星DNA已经发现了２万余个位点。 TTCAGCTAGCTCAGCAGCAGCAGCAGCAGAGCTTGC AAGTCGATCGAGTCGTCGTCGTCGTCGTCTCGAACG 最新.课件 *2 最新.课件 *2 一个家系的微卫星PCR检测结果 最新.课件 *2 SSR标记的主要特点 （1）数量丰富，广泛分布于整个基因组； （2）具有较多的等位性变异； （3）共显性标记，可鉴别出杂合子和纯合子； （4）实验重复性好，结果可靠； （5）由于创建新的标记时需知道重复序列两端的序列信息，因此其开发有一定困难，费用也较高。 最新.