猪痢疾短螺旋体分离培养操作规程.PDFVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1207-2003 猪痢疾短螺旋体分离培养操作规程 Protocolofisolationandcultureofbrachyspira hyodysenteriaeforswinedysentery 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 SN/T 1207-2003 前 言 本标准是根据 《中华人民共和国进出境动物检疫规程手册》(1997)中方法，并结合猪痢疾诊断方法 的研究基础及实践经验编写制定。 本标准的附录A是规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国湖北出人境检验检疫局、华中农业大学。 本标准主要起草人:张四喜、陈焕春、金梅林、徐共和、刘建杰、徐家文、蔡立新、王光亭。 SN/T 1207-2003 猪痢疾短螺旋体分离培养操作规程 范围 本标准规定了猪痢疾短螺旋体分离培养的方法。 本标准适用于实验室对猪痢疾的诊断。 2 缩 略语 下列缩略语适用于本标准。 SD:猪痢疾。 :.; B.h:猪痢疾短螺旋体。 2 3 B.i:非致病性短螺旋体。 4 2 B.p:结肠菌毛样短螺旋体。 3 猪痢疾短螺旋体 分离培养 3.1 材料准备 厌氧罐、高纯度氢气、高纯度二氧化碳、真空泵、恒温箱、触媒、培养基、内cm的培养皿、抗生素、脱 纤牛血等。 3.2 病料的采取和保存 采取新鲜粪便、肠内容物或病变粘膜，不要冰冻，迅速镜检或分离培养。粪便等拭子可置于含有 0.5mL磷酸缓冲盐水((0.01mol/L,pH7.2)(见第A.4章)的试管内，密封后。0C-4℃保存，3d内必须 分离培养。两头结扎的结肠段，00C--4℃可保存5d^-7de 3.3 分离用培养基 猪痢疾短螺旋体(B.h)选择分离培养基BJ，其成分和配制方法见附录A，培养基现用现配。 3.4 操作方法 将病料作直接划线或用无菌缓冲液((0.01mol/1.PBS,pH7.2)1 ‘10稀释后接种于BJ培养基，置 厌氧培养器内42℃培养，隔3d^-5d检查，无菌生长判为阴性。如有B.h生长可见到 日溶血区，溶血区 呈条状或一端稍尖的椭圆形斑点，此与其他细菌在菌落周围形成圆形溶血区有明显不同。经镜检有 B.h样微生物时((2个~4个螺旋、两端尖锐的蛇样菌)，即可在无杂菌的溶血区挑取一小块琼脂.接种于 BJ培养基37℃培养分离纯培养。在厌氧培养器与抽气机之间，连接负压表、二氧化碳袋和氢气袋各一 只，先将容器内空气抽除，然后按负压表上的刻度放进20%二氧化碳和80%氢气。容器内应预先放人 适量冷把触媒(105催化剂)，用过的冷把经 160℃烤2h后可反复使用。 B.h在形态上与B.p,B.i相同，仅可根据血液琼脂平板上俘溶血的强(B.h)弱(B.p,B.i)来作初步 区分，最终确定应作生化鉴定和致病性测定。 4 生化鉴定 三种细 菌的生化 区别 见表 1, SN/T 1207-2003 表 1 实验 猪痢疾短螺旋体 结肠菌毛样短螺旋体 非致病性短娜旋体 溶血 强 弱 弱