10 感受态细胞制备及转化实验（全）.docVIP

目 录 来源螺旋网 大肠杆菌感受态细胞的制备 2 一、CaCl 感受态细胞的制备 3 2 二、电转感受态细胞的制备 4 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化14 农杆菌感受态细胞的制备及转化17 酵母感受态细胞的制备及转化 18 关于载体连接的讨论 23 -1- 大肠杆菌感受态细胞的制备 体外连接的 DNA 重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。野生型 E.coli 并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。为了提高 受体菌摄取外源DNA 的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出不 同的方法处理细菌，经过多年的努力，科学家们发现了可以增加细胞吸收外源DNA 效率的方法，那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA 的通透性。这种经 过理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA 的生理状态，该细胞就 称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为 基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA 重组技术来了解真核和原核生物 的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化； 另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使 得它们能摄入并转化外源 DNA。